牛景芳大组报告.pptVIP

三维荧光二阶校正法直接快速测定血浆样中川芎嗪和阿魏酸含量 牛景芳 2010-11- * 1. 引言 4. 结果与讨论 3. 实验设计 2. 方法原理 三维荧光二阶校正法定量测定 血浆样中川芎嗪和阿魏酸 引言 1 川芎嗪(ligustrazine)和阿魏酸(ferulic acid)是中药川芎根茎中的活性生物碱，也是中药方剂生化汤、佛手散等的主要药理成分，具有抗炎、抗氧化、减少血小板凝聚、改善血液循环等作用。由于两者具有良好的协同作用且合用可减少毒性而被广泛用于治疗高血压、冠心病、心脑血管等疾病。但药代动力学研究表明两者在人体内代谢较快、作用时间相对较短，为保证药理药效必须维持有效的血药浓度。因此，建立一种简单快速的人体血浆样中川芎嗪和阿魏酸的定量分析方法不仅对药物代谢、作用机理及提高临床疗效等研究具有重要意义，而且也为中药复方制剂的改造、新型高效低毒药剂的研发及它们的质量控制提供可靠的参考价值。 目前文献报道的医药制剂或生物样本中川芎嗪和阿魏酸含量的检测方法主要有高效液相色谱法，毛细管电泳等。但这些方法预处理过程稍显繁琐，在简便、快速地从组成复杂的体液中灵敏、可靠地检测一些痕量药剂有效成分方面略有缺陷。相对而言，荧光方法具有灵敏度高、快速等优点，但荧光光谱的宽带特性使分析物和血浆背景的光谱严重重叠，因而常规荧光方法不能对体液中的川芎嗪和阿魏酸进行同时定量测定。而三维荧光光谱技术结合具有“二阶优势”的化学计量学二阶校正算法，用数学方法解决了背景与分析物的光谱重叠问题，能够在未知干扰共存下直接对感兴趣组分进行定量分析。本文将激发发射荧光光谱与交替三线性分解(ATLD)算法相结合，实现了对存在复杂基体效应的血浆样中川芎嗪和阿魏酸含量的同时测定。 方法原理 2 交替三线性分解(ATLD)算法基于交替最小二乘原理，通过最小化损失函数（残差阵元素平方和）来实现具有物理意义的三维数阵分解。其三线性成分模型如下： 1 I 1 K 1 J 实验设计 3 ?储备液的配制：精确称取3.8 mg盐酸川芎嗪对照品和5.4 mg阿魏酸对照品，分别配置成38 μg/ml的川芎嗪储备液和54 μg/ml的阿魏酸储备液，在4 ℃冰箱中储存。 ?实验样品的配制：在18个10 ml容量瓶中（11个校正样、6个预测样及1个血浆空白样）依次加入不同体积的工作液，用0.2% Na2CO3溶液定容（与两种分析物反应均生成盐类，从而保持它们荧光的稳定性，且避免了弱酸阿魏酸的离解）。 ?参数设置：激发波长243～410 nm，间隔为3 nm；发射波长295～560 nm，间隔为5 nm 。狭缝宽度为5.0/5.0 nm。扫描速度为2400 nm/min。 结果与讨论 4 图1 利用核一致法估计体系组分 （图1（上）为对川芎嗪解析时， 图1（下）为对阿魏酸解析时） 对川芎嗪和阿魏酸解析时截取不同的激发发射波长范围，分两次建模解析。既最大限度的利用各物质的有效光谱信息又避开了与响应信号不线性相关的瑞利、拉曼散射和血浆部分基体的干扰。故采取了对同一组三维响应数阵分段解析的策略来实现对该两种物质的同时定量测定。 图2 ATLD算法解析得到的血浆样中 川芎嗪的激发（左）和发射光谱（右） 图3 ATLD算法解析得到的血浆样中 阿魏酸的激发（左）和发射光谱（右） ?由图2，3可知，尽管血浆背景基质及加入的另一分析物干扰的激发发射光谱与待分析物的光谱严重重叠，但经算法分辨得到的血浆样中川芎嗪和阿魏酸的激发、发射光谱与其纯物质的真实光谱吻合度较好，说明该分析方法是准确可靠的。 100.8±2.5 95.7±2.2 Average recovery(%) 94.9 94.9 1.242(1.179) 7.410(7.035) 17 102.9 93.9 1.512(1.556) 7.030(6.603) 16 103.1 101.6 1.620(1.671) 5.510(5.598) 15 104.0 91.8 2.430(2.527) 4.370(4.014) 14 99.3 95.5 2.970(2.945) 3.230(3.084) 13 100.7 96.4 3.510(3.534) 2.470(2.381) 12 Ferulic Acid Ligustrazine Ferulic Acid Ligustrazine Recovery(%) Predicted concentration(μg/ml) Sample 表1 ATLD算法分辨得到的血浆样中川芎嗪和阿魏酸的浓度 回收率 （%） ?用ATLD算法对扫描获得三维响应数据阵进行解析，得到的血浆样中川芎嗪和阿魏酸的解析结果见表1，表2. *