苹果轮纹病菌对戊唑醇敏感基线及其室内抗药突变体研究.docVIP

苹果轮纹病菌对戊唑醇敏感基线及其室内抗药突变体研究 　　摘 要： 【目的】为明确苹果主产区轮纹病菌对戊唑醇的敏感现状，并评价苹果轮纹病菌对戊唑醇的抗性风险，【方法】采用菌丝生长速率法，测定了51株采自山东、河北、陕西等地的苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性，并通过紫外线诱变野生敏感菌株获得抗药性突变体，进一步利用菌丝生长速率法测定抗性菌株对其他一些杀菌剂的交互抗性并比较其与敏感菌株之间的部分生物学特性。【结果】51株苹果轮纹病菌菌株EC50值分布于0.0111～ 0.7264 mg·L-1，平均EC50值（0.2541±0.0151） mg·L-1，其对戊唑醇的敏感性呈单峰分布，可作为将来进行田间苹果轮纹病菌对戊唑醇抗药性检测的敏感性基线。通过紫外线诱变野生敏感菌株获得9株抗性突变体，抗性倍数在11.00～67.88。抗性菌株UV- TS1-10对丙环唑等7种药剂表现出了不同程度的交互抗药性。9株抗戊唑醇突变体继代培养至第9代，抗性倍数逐渐下降，表明所获抗性不能稳定遗传。抗药性突变体的菌丝生长速率与亲本菌株无明显差异，而菌丝干重却与亲本菌株相比显著性降低。【结论】苹果轮纹病菌对戊唑醇具有中度至高度抗药性风险，生产中需引起高度重视。 　　关键词： 苹果轮纹病菌； 戊唑醇； 敏感基线； 抗药突变体 　　中图分类号：S661.1 文献标志码：A 文章编号：1009-9980？穴2013？雪04-0650-07 　　苹果轮纹病（Apple ring rot）在中国最早于1928年发现于辽宁，随着易感轮纹病品种富士在中国的大面积推广，该病已成为近年来苹果生产上危害最为严重的一种病害[1]，可同时危害苹果树的枝干和果实，且贮藏期可持续发病[2-3]，给果农带来严重的经济损失。当前化学杀菌剂仍是防治苹果轮纹病的主要手段，其中，戊唑醇是近年筛选出防治苹果轮纹病的重要化学农药品种，该药剂是德国拜耳公司于20世纪80年代开发的三唑类杀菌剂，90年代中期开始在中国苹果树上登记使用[4]。戊唑醇通过阻碍真菌麦角甾醇的生物合成而影响真菌细胞膜的形成，具有内吸、广谱特点[5]，对苹果轮纹病具有良好的防治效果[1]，近年来该药剂已成为防治苹果轮纹病的主要杀菌剂。Leroux等[6]田间监测到了葡萄灰霉病菌（Botryotinia fuckeliana）对戊唑醇的抗性菌株，Robbertse等[7]研究发现大麦上连续3年使用戊唑醇，大麦云纹病菌（Rhynchosporium secalis）对其敏感性显著降低，Ma等[8]在连续4 a使用戊唑醇的开心果果园发现开心果枝枯病菌（Botryosphaeria dothidea）对戊唑醇的EC50值显著高于由野生敏感菌株建立的敏感基线。目前，尚未见到关于苹果轮纹病菌对戊唑醇抗药性的系统报道，而抗性菌株生物学特性研究对预测抗性的发生发展，以及制定科学的病害防治策略具有重要意义。作者通过检测苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性，建立了敏感基线，并通过紫外诱导获得了抗性菌株，测定了敏感菌株与抗性菌株之间的生物学特性差异，明确该菌对戊唑醇的抗性风险，为戊唑醇的合理使用，避免或减缓该菌对戊唑醇抗性的产生提供科学依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 菌株 苹果轮纹病果于2007年8—10月从山东（栖霞、沂源、蒙阴、泰山）、河北（衡水）、陕西（大荔、合阳、澄城）等地的不同行政区域且相距一定距离的未施用过戊唑醇及其他三唑类药剂的果园内采集，装入干净的小塑料袋中（每个袋子只装一个标本），带回实验室分离纯化，鉴定后获得51株苹果轮纹病菌株（Botryosphaeria dothidea）。 　　1.1.2 供试药剂 98% 戊唑醇（Tebuconazole）原药，江苏常隆化工有限公司；98.8%嘧菌酯（Azoxystrobin）原药，上虞颖泰精细化工有限公司；95%醚菌酯（kresoxim-methyl）原药，山东亿嘉农化有限公司；96%异菌脲（Iprodione）原药，江西禾益化工有限公司；97%多菌灵（Carbendazim）原药，青岛瀚生公司；96.4%丙环唑（Propiconazole）原药，江苏扬农化工集团；95.8%苯醚甲环唑（Difenoconazole）原药，青岛瀚生公司；92%氟硅唑（Flusilazole）原药，青岛瀚生公司。将多菌灵原药溶于1 mol·L-1 HCL溶液，其余原药溶于丙酮，制成104 mg·L-1的母液，置4 ℃冰箱中保存备用。 　　1.2 苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性测定 　　1.4 抗性菌系遗传稳定性测定 　　将抗药突变体菌株在无药PDA平板上连续继代培养9代，按1.2中的菌丝生长速率法测定连续继代后第1，3，5，7，9代抗性菌株对戊唑醇的敏感性（EC50值）