4 药物非临床期安全性评价.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2.常用致突变试验检测的遗传学终点 遗传学终点 现 象 致突变试验 DNA完整性的改变 形成加合物/断裂/交联 细菌DNA修复试验 彗星试验 DNA重排或交换 DNA修复合成、重组 SCE试验 DNA碱基序列改变 基因突变 Ames试验 染色体完整性改变 染色体受损断裂等 微核试验、染色体畸变分析 染色体分离改变 整倍体或非整倍体 染色体畸变分析 * * 药物临床前期安全性评价 3.致突变试验配套组合的基本原则 ? 试验组应包括每一类型的遗传学终点， 如细胞回复突变试验、微核试验、细菌 DNA修复试验和体外姐妹染色单体交换试验（SCE)。（遗传学终点的齐全） ?试验组中的指示生物应包括几个进化阶段，至少要包括原核细胞与真核细胞两个系统（包括有原核生物和真核生物 ） ?试验组应包括体内试验与体外试验（体内试验与体外试验相配合），体外试验（+S9和-S9)和体内试验细胞突变试验为阳性者有必要进行生殖细胞突变试验。（包括生殖细胞和体细胞） * * 药物临床前期安全性评价 通常对于一种受试物应当先用原核细胞或体细胞的体外试验按遗传学 终点合理配套进行试验，并对有阳性结果的遗传学终点验证其在体内 的真实性，再行选用生殖细胞致突变试验进行遗传危害的评价。 ICH(人用药品注册技术要求国际协调会)推荐的组合方案为(我国药物遗 传毒性研究技术指导原则 ，2006年基本相同）： (1)细菌回复突变试验; (2)哺乳动物细胞染色体或基因损伤试验(如体外哺乳动物染色体畸变试验或小鼠淋巴瘤tk试验); (3) 体内啮齿类造血系统染色体损伤试验(骨髓嗜多染红细胞微核试验)。 如出现阳性结果，需进一步补充试验。 4.致突变试验选择的基本步骤 * * 药物临床前期安全性评价 Take a break * * 药物临床前期安全性评价 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验） 组氨酸突变菌(his-)在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长,如回复 突变成野生型(his+)后则可以生长。用组氨酸突变菌(his-)作为指示 菌观察化学物的诱变性. 正向突变 鼠伤寒沙门氏菌原养型(his+) 鼠伤寒沙门氏菌突变型(his-) 　　　　　　　　　　　　　　 回复突变 ±代谢活化系统(S9) 受试物 Ames 试验原理示意图 * * 药物临床前期安全性评价 无组氨酸 培养基 (-S9) 非诱变剂 接种 直接诱变剂 无组氨酸 培养基 (+S9) 间接诱变剂 结果判断示意图 +受试物 +受试物 * * 药物临床前期安全性评价 体外染色体畸变试验 CHO、V79、外周血淋巴细胞 加受试物培养一定时间 收获细胞前2小时，加秋水仙碱 停滞在分裂中期 低渗、固定、制片、染色 分析中期相细胞染色体 * * 药物临床前期安全性评价 无着丝点断片 染色单体断裂 三辐射体 染色 体断片 双着丝点染色体 环状染色体 * * 药物临床前期安全性评价 微核试验 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成 * * 药物临床前期安全性评价 微核试验简单操作程序 大鼠或小鼠 每天染毒一次，连续四天 第五天处死动物，取出骨髓，涂片，固定，染色 计数PCE的微核细胞率 * * 药物临床前期安全性评价 1.嗜多染红细胞 3.正染红细胞 2.微核-PCE 1 2 3 * * 药物临床前期安全性评价 显性致死试验 成年雄性大鼠(敏感) 每天染毒一次、连续5天 与雌性大鼠交配(分批多次) 受孕后第16～17天处死受孕动物 检查着床数、死胎数和活胎数 * * 药物临床前期安全性评价 小鼠、大鼠精子分化阶段与交配周次的关系 交配周次 小鼠 大鼠 输精管及睾丸中的精子 第1周 第1、2周 精细胞(后期)