外翻肠囊吸收成分与药效相关研究吴茱萸汤治疗偏头痛药效物质.docVIP

外翻肠囊吸收成分与药效相关研究吴茱萸汤治疗偏头痛药效物质 　　[摘要] 吴茱萸汤是治疗虚寒性偏头痛的经典方剂，其与偏头痛治疗相关的有效成分尚不明确。该实验采用大鼠外翻肠囊模型获取10种吴茱萸汤的吸收样品，以 HPLC-DAD对吴茱萸汤及外翻肠囊吸收样品中9种成分进行定量、半定量，得到各成分在汤中的含量及在肠囊中的累积吸收量。同时建立利血平化小鼠偏头痛动物模型，在给予吴茱萸汤治疗后测定脑组织内5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT），去甲肾上腺素（noradrenaline，NE），多巴胺（dopamine，DA）及脑组织与血清内一氧化氮（nitric oxide，NO）及其合成酶（nitricoxide synthase，NOS）的含量与活力。最后运用偏最小二乘回归法（partial least squares regression，PLSR）对各成分总吸收量与药效指标进行相关分析，发现了外翻肠囊吸收成分中影响药效的主要成分是柠檬黄素-3-O-β-D-葡萄糖苷（limocitrin-3-O-β-D-glucoside，Lcs），人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1，Rg1），人参皂苷Rb1（ginsenoside Rb1，Rb1）、吴茱萸苦素（rutaevine，Rv）、柠檬苦素（limonin，Li）、吴茱萸碱（evodiamine，Ev）及吴茱萸次碱（rutaecarpine，Ru），其中Rg1，Rv，Ev及Ru对多数药效指标具有正向改善作用，可能是影响吴茱萸汤治疗偏头痛作用的主要成分。 　　[关键词] 吴茱萸汤；偏头痛；外翻肠囊吸收谱效相关；偏最小二乘回归；药效物质 　　[收稿日期] 2013-08-17 　　[基金项目] 北京市教育委员会科技计划面上项目（SQKM201210025011）；首都中医药研究专项重点课题项目（13ZY02） 　　[通信作者] *龚慕辛，博士，博士生导师，从事中药复方物质基础研究，Tel：（010E-mail：gongmuxin@126.com 　　[作者简介] 潘学强，硕士研究生，E-mail：pxq_xq@163.com 　　吴茱萸汤出自《伤寒论》，现代临床上主要用于治疗多种头痛[1]。全方由吴茱萸、生姜、人参及大枣4味中药组成。曾有学者采用化学分析与药理相结合的方法对其药效物质进行研究[2-3]，但由于缺乏成分分析与治疗偏头痛相关药效指标的关联，使其有效成分尚不明确，影响了质量控制与治疗作用的优化。本实验将10种吴茱萸汤中的9种成分在外翻肠囊的累积吸收量与偏头痛药效指标相关联，采用PLSR进行分析，???与吴茱萸汤谱效相关结果进行对比，以发现吴茱萸汤吸收成分中影响药效的主要成分，为其治疗偏头痛的药效物质研究提供参考。 　　1 材料 　　ALC-M组织-器官恒温水浴系统（上海奥尔科特生物技术有限公司）；Agilent 1100系列高效液相色谱系统，Chemstation色谱工作站，含四元泵、自动进样器、DAD检测器（Agilent公司）；ESA高效液相色谱系统，Coularry 工作站，含二元泵，自动进样器，电化学检测器（ESA公司）；MG-2200氮吹仪（EYELA公司）；Silent Crusher M匀浆仪（ Heidolph公司）；3K15低温高速离心机（Sigma公司）；UV-2450紫外可见分光光度计（SHIMADZU公司）；SpectraMax Plus 384酶联免疫检测仪（Molecular Devices公司）；DV215CD电子分析天平（Sartorius公司）；KQ-250超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 　　利血平注射液（广东邦民制药厂有限公司，批号100509）；琥珀酸舒马普坦片（天津华津制药有限公司，批号2F69151）；注射用青霉素钠（中诺药业有限公司，批号016110691）；NO测定试剂盒（批，NOS测定试剂盒（批，考马斯亮蓝试剂盒（批，均购自南京建成生物工程研究所；吴茱萸碱（批号110801-200908，纯度99.7%），吴茱萸次碱（批号110801-201207，纯度99.4%），柠檬苦素（批号110800-201205，纯度88.5%），人参皂苷Rg1（批号110703-201128，纯度93.4%），人参皂苷Re（批号110754-201123，纯度89.1%），人参皂苷Rb1（批号110704-201223，纯度95.9%），6-姜辣素（批号111833-201102，纯度98.6%）对照品购自中国食品药品检定研究院；柠檬黄素-3-O-β-D-葡萄糖苷（自制，纯度≥95%）；5-HT（批号N-5785