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凝结多糖成分分析的实验方案 一、粗脂肪含量的测定 1.实验材料、主要仪器与主要试剂 ①实验材料 凝结多糖 ②主要仪器 索氏脂肪抽提器、干燥器（直径15~18cm，盛变色硅胶）、不锈钢镊子、培养皿、分析天平（感量0.001kg）、称量瓶、恒温水浴锅、烘箱、样品筛（60目）、中数滤纸 ③主要试剂 无水乙醚或低沸点石油醚（A.R.） 2.实验步骤 ①滤纸预处理 将滤纸切成8cm×8cm，叠成一边不封口的纸包，编号放入培养皿中。然后将盛有滤纸包的培养皿移入（105±2）℃烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷却至室温。按顺序将各滤纸包放入同一称量瓶中称重（记作a）。 ②包装和干燥 在上述已称重的滤纸包中装入3g左右研细的样品，封好包口，放入（105±2）℃烘箱中干燥3h，取出放入干燥器中，冷却至室温。按顺序号依次放入称量瓶中称重（记作b）。 ③抽提 将装有样品的滤纸包有长镊子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67倍的无水乙醚，使样品包完全浸没在乙醚中。连接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒温水浴中进行抽提，调节水温在70~80℃之间，使冷凝下滴的乙醚成连珠状（120~150滴/min或回流7次/h以上），抽提至抽提筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止（约6~12h）。抽提完毕后，用长镊子取出滤纸包，在通风处使乙醚挥发，抽提瓶中乙醚另行回收。 ④称重 待乙醚挥发后，将滤纸包置于（105±2）℃烘箱中干燥2h，放入干燥器冷却至恒重为止（记作c）。 3数据处理 粗脂肪含量（%）=（b－c）/ (b－a) 式中 a——称量瓶加滤纸包的质量，g； b——称量瓶加滤纸包和烘干样的质量，g； c——称量瓶加滤纸包和抽提后干残渣的质量，g； 二、总灰分含量的测定 1.主要仪器 高温电炉、坩埚钳、带盖坩埚（石英坩埚或瓷坩埚）、分析天平、干燥器 2.实验步骤 ①坩埚的准备 将坩埚用体积分数为20%盐酸煮1~2h，洗净晾干后，用三氯化铁与蓝墨水的混合液在坩埚外壁及盖上写上编号。置于马福炉中，在（550±25）℃下灼烧0.5h，冷至200℃以下后，取出。放入干燥器中冷却至室温，准确称量，并反复灼烧至恒重（两次称量之差不超过0.5mg）。 ②样品的预处理 a 样品的取样量 以灰分10~100mg来决定试样的取样量。通常取凝结多糖1~2g即可。 b 样品的处理 凝结多糖水分含量少的固体样品，先粉碎均匀，再取适量样品于已知质量的坩埚中进行炭化。 ③样品的炭化 试样经上述预处理后，以小火加热试样充分炭化至无烟。 ④样品的灰化 炭化后的试样置马福炉中，在（550±25）℃下灼烧4h。冷至200℃以下后取出，放入干燥器中冷却30min。在称量前如灼烧残渣有炭粒时，应向试样中滴入少许水湿润，使结块松散，蒸出水分再次灼烧直至无炭粒即灰化完全，冷至200℃以下，取出放入干燥器中冷却30min，准确称量。反复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg即为恒重。 3数据处理 ①数据记录 数据记录表 空坩埚质量 样品和坩埚质量 残灰和坩埚质量（m3）/g （m1）/g （m2）/g 1 2 恒重 ②计算 X = (m3-m1) / (m2-m1) 式中X——样品总灰分的含量； m1——空坩埚的质量，g; m2——样品和坩埚的质量，g; m3——残灰和坩埚的质量，g。 三、还原糖含量的测定 方法：直接滴定法 1.目的与要求 ①了解和掌握直接滴定法测定还原糖的原理。 ②通过实验测定凝结多糖中还原糖的含量。 2.原理 将等量的碱性酒石酸铜甲液、乙液混合时，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀立即与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠络合物。此络合物与还原糖共热时，二价铜即被还原糖还原为一价的氢氧化铜沉淀，氧化亚铜与亚铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原成无色，溶液呈淡黄色而指示滴定终点。根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，以及测定样品液所消耗的体积，计算还原糖的含量。 3.仪器与试剂 ①试剂 a.盐酸 b.碱性酒石酸铜甲液 称取15g硫酸铜及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000ml。 c. 碱性酒石酸铜乙液 称取50g酒石酸钾钠、75g氢氧化钠。溶于水中。再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml,储存于橡胶塞玻璃瓶中。 d.乙酸锌溶液 称取21.9乙酸锌，加3ml冰醋酸，加水溶解并稀释至100ml. e.葡萄糖标准溶液 准确称取1.0000g至（96±2）℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸，并以水稀