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Ro 25―6981对骨癌痛大鼠脊髓后角JAKSATA3通路影响 　　【摘要】 目的 观察N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体2B亚型选择性拮抗剂Ro 25-6981对胫骨癌痛大鼠脊髓后角NR2B受体及JAK/SATA3通路的影响。方法 采用Walker256乳腺癌细胞建立雄性SD大鼠胫骨癌痛模型。将大鼠随机分为3组（n=8）：假手术组（sham）、模型组（Model）、Ro 25-6981预先给药组（R）。鞘内注射后，观察Ro 25-6981对大鼠脊髓背角NR2B表达，STAT3的表达及痛阈的影响。结果 与sham组比较，M组术后7，14d时机械痛阈降低（P0.05）；与M组比较，R组术后7，14d时机械痛阈升高（P 　　【关键词】 癌性疼痛；NR2B拮抗剂；STAT3 　　骨癌痛引起的伤害感受不同于炎性痛和神经病理性痛引起的伤害感受，存在不同的外周机制[1]。有证据表明激活的神经胶质细胞（小胶质细胞和星形胶质细胞）参与慢性病理性疼痛的发生和维持。Taga等[2]研究认为，星形胶质细胞的活化很大程度上依赖于IL-6家族细胞因子介导的STAT3激活。越来越多的实验证实NR2B在慢性疼痛的发生及发展中起到重要的作用[3-4]。其酪氨酸磷酸化不仅调节NMDA受体通道的活性，而且还通过NMDA受体SH2位点调节细胞内信号转导[5]。 　　本研究旨在探讨另一种NMDA受体2B亚型高选择性拮抗剂Ro25_6981对骨癌痛大鼠脊髓背角JAK2/STAT3信号通路的影响，探讨其在骨癌痛的发生、维持及和发展中的作用机制。 　　1 资料与方法 　　1.1 实验动物 雌性SD大鼠24只，体重150-200g。由苏州大学医学院实验动物中心提供。药品Ro 25-6981及抗体NR2B，STAT3均购自美国Santa Cruz 公司，免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。 　　1.2 实验分组与操作 　　1.2.1 实验分组 Sham组（n=8）：大鼠行鞘内置管选择无置管并发症的个体。M组（n=8）：建立大鼠骨癌痛模型并行鞘内置管，选择无置管并发症的个体。R组Ro25_6981预先给药组（n=8）：操作同模型组，并于建立大鼠骨癌痛模型前30min及术后1-3d连续IT Ro25-6981 20μl（5μg/μl）。 　　1.2.2 鞘内置管法 将PE-10微导管经切开的椎间隙置入脊髓蛛网膜下腔1.5-2cm，使导管头端位于腰膨大附近。以下情况者剔除：①下肢跛行、瘫痪、感染、活动异常、导管脱落者；②实验后蛛网膜下腔注入2%利多卡因10μl，不立即???现后肢瘫痪者。 　　1.2.3 模型制备 将大鼠经腹腔注射3%戊巴比妥钠麻醉后，腹部朝上，左侧后肢剪毛，消毒，切开约1cm小口，小心暴露胫骨上段，先打孔，然后换用5μl微量注射器向骨髓腔缓慢注入4μl含4×104个Walker-256癌细胞的细胞悬液，迅速用骨蜡封孔缝合；假手术组动物注入等体积的生理盐水，其余操作同模型组。给药组于模型制备前30分钟鞘内注射Ro25-6981 20μl（5μg/μl）。 　　1.3 模型行为学评价 分别于手术前及手术后第1、3、7、14天用大鼠足趾加压法测量机械刺激痛阈。 　　机械痛阈：用持续上升的金属针直接刺激大鼠双后肢足底，最大压力为50.0g/s，记录大鼠后肢收缩时的压力阈值（PWPT），每次刺激间隔5min，取三次平均值。 　　1.4 检测指标 　　1.4.1 脊髓背角NR2B亚基蛋白表达的测定 三组于术后14d测定痛阈后取左侧L4-6脊髓背角组织，立即置于液氮中，最后转移至-80℃冰箱内保存。采用Western-blot法测定脊髓背角NR2B亚基蛋白表达。 　　1.4.2 STAT3表达的测定 免疫细胞组织化学染色法。各组大鼠在第14天测痛后行常规灌注固定之后摘取L4-6段脊髓，行20μm厚水平连续冰冻切片。经STAT3免疫细胞化学染色吸光度测定。每张切片平均选取4个视野进行分析，并以无阳性产物处吸光度为背景值以获得校正吸光度值（correct optic density，CA）。 　　1.4.3 脊髓中IL-6含量的变化 三组于术后14d测定痛阈后取左侧L4-6脊髓组织，根据IL-6ELISA检测试剂盒说明书进行操作，求出各组浓度值。 　　1.5 统计学处理 用SPSSl7.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（χ±s）表示，组间比较采用单因素方差分析（X2），P 　　JAK2-STAT3通路是许多细胞因子及多种炎症介质的重要信号交汇（cross talk）和调控系统之一。骨癌痛模型大鼠脊髓背角GFAP表达增加[8]，免疫荧光组化双标显示患侧脊髓STAT3与星形胶质细胞标志物GFAP有共表达，表明脊髓星形胶