中药风湿宁对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜组织ICAM1表达影响.docVIP

中药风湿宁对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜组织ICAM1表达的影响 作者：黄映红 曾洁萍 张耿豪 【摘要】 目的：探讨中药复方风湿宁(FSN)对实验性类风湿性关节炎(RA)的疗效及作用机理。方法：以佐剂性关节炎(adjunvant arthritis,AA)大鼠为实验对象，分别予以FSN与雷公藤多甙(TWP)进行治疗，对照观察大鼠关节肿胀程度，以及关节内病理组织学变化情况。采用免疫组织化学检测各组AA大鼠病变关节滑膜组织中ICAM1的表达。结果：FSN可显著抑制AA大鼠足跖肿胀，明显减轻病变关节滑膜炎症与增生，防止关节软骨及骨质的破坏;FSN能明显降低ICAM1在AA大鼠滑膜组织的表达(Plt;0.01) 结论：FSN具有改善实验性RA症状及病情的作用，其抗炎作用与调控滑膜细胞细胞间及细胞细胞外基质间的粘附作用有关。 【关键词】 风湿宁;佐剂性关节炎;细胞间粘附分子1(ICAM1) 类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis ,RA) 是一种常见的以关节滑膜病变为主的自身免疫性疾病[1]。由于RA病理表现复杂，发病机制也尚未明确，临床治疗相当棘手。众多研究均显示，中药抗RA具有一定的优势，抗RA中药除抗炎镇痛作用外，还具有免疫调节效应，表现出整体调节、多环节、多途径的作用[2]。本研究以完全弗氏佐剂诱导的佐剂关节炎(Adjuvant arthritis, AA)大鼠作为RA动物模型，观察王再谟教授临床经验方——风湿宁(FSN)治疗RA的作用特点,并且通过检测大鼠关节滑膜组织内ICAM1的表达，探讨FSN抗炎作用的机制,为该方的临床应用以及中药抗RA作用机理的研究提供新的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物 雄性SpragueDawlay(SD)大鼠58只，体重172～215g，由成都中医药大学动物实验中心提供(生产合格证：川实动管质第99-11号)。在清洁级实验动物室内饲养,适应性饲养2周后, 用于实验。 　　1.1.2 药品及试剂卡介苗冻干粉(60mg/支)，购自四川生物制品研究所;FSN浸膏，药物组成包括独活、威灵仙、五加皮、川芎、防己、青风藤等，由广汉市中医药研究所将原方药物制成半浸膏，临用时以蒸馏水配制成悬浊液，高、低剂量组浓度分别为0.210 g·ml-1、0.105 g·ml-1，相当于原生药1.90 g·ml-1、0.95 g·ml-1;阳性对照药雷公藤，上海医科大学红旗制药厂生产，批羊ICAM1多克隆抗体(C19、M19)，由Santa Cruz公司提供。二抗试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物分组 将58只SD大鼠随机分为5组：正常对照组10只、模型组12只、阳性对照药组12只、FSN低剂量组12只、FSN高剂量组12只。 　　1.2.2 AA模型制作 除正常对照组外,其余各组大鼠于右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂0.1ml致炎,诱发AA发生。 　　1.2.3 给药及标本采集实验第14d，选择已出现继发性关节炎的大鼠，开始定时灌胃治疗。正常对照组、阳性对照组致炎后给予蒸馏水灌胃;高低剂量治疗组于致炎后开始给予FSN治疗, 给药剂量分别为高剂量治疗组2.10 g·kg-1，低剂量治疗组1.05 g·kg-1，阳性对照组予TWH 10 mg·kg-1, 每日1次。末次给药后24h称重，断头处死大鼠，取大鼠左踝关节组织，灌注固定，立即送成都中医药大学附属医院病理科备检。 　　1.3指标测定 　　1.3.1 关节肿胀程度 自造模第14d始，参照文献方法[3]，对大鼠多发性关节炎进行评分，累计关节炎指数(AI)。记分标准为：0分：正常;1分：发红或微肿胀;2分：中度肿胀;3分，严重肿胀;4分：严重肿胀且不能负重。 　　1.3.2 关节HE染色观察 固定大鼠左踝关节48h，EDTA脱钙，常规进行石蜡包埋,切片4μm, HE染色，光镜下观察组织形态变化。采用BioMias计算机图象分析系统测量滑膜组织的增生程度，以每只动物三张切片所得数据的平均值代表该样本的结果。 　　1.3.3 AA大鼠关节滑膜组织中ICAM1表达 采用免疫组织化学染色法，按照试剂盒所附说明书进行检测。用BioMias计算机图象处理分析软件对信号强度进行分析，计算定量的阳性染色目标总数、积分光密度值，取每只动物三张切片所得数据的总和或平均值进行统计。 　　1.4 统计方法 　　采用SPSS统计软件进行分析。多组间比较用单因素方差分析，多组间两两比较用q检验(SNK法)。 　　2 结果 　　2.1 FSN对AA大鼠继发性关节炎变化的影响 　　从实验第9d起，观察到少数大鼠(4/48)开始出现继发性的足跖红肿;至实验第14