染色法培养基与试剂配制作业指导书.docVIP

第 PAGE 16 页 共 NUMPAGES 16 页 修改记录单 版本 时间 简述 A 2003-11-15 新发行 A 2004-06-02 品控部改为品质部 FILENAME 染色法、培养基和（微生物检验）试剂配制作业指导书 1 目的 对染色法、培养基和试剂配制方法作出明确规定，为检测结果的准确性提供最基本的保证。 2 范围 适用于微生物检验。 3 职责 3.1微检人员负责培养基、试剂配制。 3.2微检人员掌握微生物的染色方法。 4 培养基和试剂配制名称、用途 名称 用途 4.1 革兰氏染色液 微生物染色 4.2 营养琼脂 细菌培养和细菌总数测定 4.3 孟加拉红培养基 霉菌、酵母菌计数 4.4 乳糖胆盐发酵管 大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定 4.5 乳糖发酵管 供大肠菌群证实试验用 4.6 三糖铁琼脂 肠杆菌科细菌的生化反应筛选 4.7 伊红美兰琼脂 分离肠道致病菌。 4.8 缓冲蛋白胨水 沙门氏菌检验中的前增菌 4.9 四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液 沙门氏菌检验中的前增菌 4.10 GN增菌液 志贺氏菌的前增菌 4.11 亚硒酸盐胱氨酸增菌液 沙门氏菌选择性增菌培养 4.12 SS琼脂 沙门氏菌、志贺氏菌的分离 4.13 V-P半固体琼脂 细菌检验的V-P试验 4.14 7.5%氯化钠肉汤 金黄色葡萄球菌的增菌培养 4.15 Baird-Parker培养基 金黄色葡萄球菌的检验 4.16 酸性肉汤 酸性罐头食品商业无菌检验 4.17 尿素琼脂基础 细菌检验中的尿素酶试验 4.18 赖氨酸脱羧酶培养基 细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验 4.19 吲哚培养基 细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤 4.20 硝酸盐氰化钾培养基 细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验 4.21 生理盐水 检样的溶解与稀释 5 具体内容 5.1革兰氏染色法 5.1.1革兰氏染色液 5.1.1.1结晶紫染色液 成份： 结晶紫 1.0g 95%乙醇 20.0ml 1%草酸铵水溶液 80.0ml 5.1.1.2革兰氏碘液 成份： 碘 1.0g 碘化钾 2.0g 蒸馏水 300.0ml 5.1.1.3 95%乙醇 5.1.1.4沙黄复染液 成份： 沙黄 0.25g 95%乙醇 10.0ml 蒸馏水 90.0ml 5.1.2染色法 5.1.2.1将涂片在火焰上固定。 5.1.2.2初染：滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。 5.1.2.3媒染：滴加革兰氏碘液，作用1 min，水洗。 5.1.2.4脱色：滴加95%乙醇脱色，水洗；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗。 5.1.2.5复染：滴加沙黄复染液，染1min，水洗，待干，镜检。 5.1.2.6结果判定：革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。 5.2一般培养基和专用培养基 5.2.1营养琼脂 5.2.1.1用途：用于一般细菌培养及细菌总数测定。 5.2.2.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0 牛肉粉 3.0 氯化钠 5.0 琼脂 15.0 PH7.3±0.1 5.2.2.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃15 min高压灭菌备用。 5.2.2.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。 5.2.2孟加拉红培养基 5.2.2.1用途：用于粮食、食品、饮料中霉菌、酵母菌计数。 5.2.2.2成份（g/L）： 蛋白胨 5.0 葡萄糖 10.0 磷酸二氢钾 1.0 硫酸镁 0.5 孟加拉红 0.03 氯霉菌 0.1 琼脂 15.0 5.2.2.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20 min高压灭菌备用。 5.2.2.4注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。 5.2.3乳糖胆盐发酵管 5.2.3.1用途：用于大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定。 5.2.3.2成份（g/L）： 蛋白胨 20.0 胆盐