自发性高血压大鼠肠系膜微淋巴管自律运动的改变及基质金属蛋白酶抑制剂减轻血管钙化的机制研究-病理学与病理生理学专业论文.docx

目录中文摘要l英文摘要5第一部分自发性高血压大鼠肠系膜微淋巴管自律运动的改变．．9前言HU舌．．9材料与方法．13结果．．19讨论．．30结论．．33参考文献．34第二部分基质金属蛋白酶抑制剂通过下调BMP．2抑制大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙化．39前言．．39材料与方法．．43结果一62讨论．．79结论．．82参考文献．83英文缩写词表．．95己发表文章．．96待发表文章123个人简历189致谢19l独创性声明192学位论文版权使用授权书193微循环研究所学术规范协议书一194万方数据中国医学科学院北京协和医学院博士研究生学位论文中文摘要第一部分自发性高血压大鼠肠系膜微淋巴管自律运动的改变目的动态监测并定量分析不同周龄自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜微淋巴管自律运动的特点。方法取3周、8周和13周的雄性Wistar大鼠和SHR，麻醉、固定并暴露肠系膜后，在活体显微镜下动态监测肠系膜微淋巴管的自律运动并录像，运用VasTrack自动测量系统对录像进行定量和分析。分析的指标包括微淋巴管自律运动的相对振幅、频率、收缩期及舒张期的幅度、时长和速度，并根据频率、最大舒张管径和最大收缩管径计算出肠系膜微淋巴管收缩功能的两个指标：收缩分数和总收缩活性指数。结果(1)SHR与Wistar大鼠肠系膜微淋巴管自律运动在不同周龄的差别：3周龄SHR与3周龄Wistar大鼠微淋巴管自律运动在各个指标方面均无显著差异(均为P0．05)。到8周龄时，SHR微淋巴管自律运动的相对振幅、收缩幅度、收缩时长、收缩速度、舒张幅度、舒张速度及总收缩活性指数均显著低于Wistar大鼠(分别为P0．001，P0．01，P0．05，P0．01，P0．001，P0．01，P0．05)，SHR微淋巴管自律运动的频率、舒张时长和收缩分数与Wistar大鼠无显著差异(均为P0．05)。到13周龄时，SHR微淋巴管自律运动的相对振幅、收缩幅度、收缩时长、舒张幅度、舒张时长和收缩分数显著低于Wistar大鼠(均为P0．001)，频率和舒张速度显著高于Wistar大鼠(均为P0．05)，收缩速度和总收缩活性指数与Wistar大鼠无显著差异(均为P0．05)。(2)SHR肠系膜微淋巴管自律运动在不同周龄的差别：与3周龄SHR相比，8周龄SHR淋巴管自律运动的相对振幅、频率、舒张幅度、舒张速度和总收缩活性指数显著降低(分别为P0．05，P0．05，P0．05，P0．01，P0．01)。8周龄SHR的收缩幅度、收缩时长、收缩速度、舒张时长和收缩分数与3周龄SHR相比，均无显著差异(均为P0．05)。13周龄SHR的收缩频率、收缩速度、舒张速1万方数据中国医学科学院北京协和医学院博士研究生学位论文度和总收缩活性指数均显著高于8周龄SHR(分别为P0．05，P0．05，P0．01，P0．01)；13周龄SHR的收缩时长、舒张时长和收缩分数均显著低于8周龄SHR(分别为P0．05，P0．01，P0．05)；13周龄SHR的相对振幅、收缩幅度和舒张幅度与8周龄SHR相比，均无显著差异(均为P0．05)。结论(1)SHR与Wistar大鼠的肠系膜微淋巴管均存在自律运动。(2)高血压可能是引起SHR肠系膜微淋巴管自律运动障碍的一个重要因素。(3)高血压发生后，SHR肠系膜微淋巴管自律运动的舒张期活动减弱，收缩功能显著下降。(4)高血压进展过程中，SHR微淋巴管自律运动的紊乱体现在收缩功能增强，而收缩功能增强更有利于机体内环境的稳态。关键词：高血压；微循环；微淋巴管；自律运动；自发性高血压万方数据中国医学科学院北京协和医学院博士研究生学位论文第二部分基质金属蛋白酶抑制剂通过下调BMP．2抑制大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙化目的探讨基质金属蛋白酶(MMPs)在血管钙化中的作用及其机制。方法取8周龄雄性Wistar大鼠，贴块法培养主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)，形态学和免疫荧光法鉴定VSMCs。对照组的VSMCs采用DMEM培养基，钙化组用D．甘油磷酸(p-GP)诱导VSMCs发生钙化，MMPs抑制剂组用i3-GP+MMPs抑制剂多西环素(doxycycline，Doxy)。培养12天后，对VSMCs进行vonkossa染色和钙含量分析，以检测VSMCs钙化。用试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性，用Westemblot检测a．SMA，Desmin及ALP的蛋白表达，以观察VSMCs表型改变。Westernblot检测MMP．2、MMP．9蛋白表达水平，明胶酶谱法检测MMP．2、MMP一9的酶活性，以观察MMPs抑制剂多西环素的抑制效果。Westernblot检测骨形态发生蛋白．2(BMP一2)及其受体、RUNX2、Msx．2的表达水平，以探讨MMPs抑制后BMP．2通路的变化。用TUNEL法检测VSMCs凋