白血病细胞shp1与socs3基因表达的相关性研究及甲基化抑制剂对shp1基因表达的影响-correlation between sh p1 and socs3 gene expression in leukemic cells and effect of methylation inhibitor on sh p1 gene expression.docxVIP

中文摘要发病机制中的作用。为临床上DNA甲基化在肿瘤早期诊断 和预后分析中以及在肿瘤的预防和治疗中可能具有的重要 作用。方法：本研究对象为75例急性白 》N(acute leukemia， AL)患者。初治患者49t歹0，复发患者5例，缓解患者21例(其 中追踪观察8例从初治到缓解的患者、)。急性髓细胞白血病 (acute myelocytic leukemia，AML)患者551N[M1 2例、M2 11例、 M3 18例、M4 5例、M5 161Y0、M6 2例、骨髓增生异常综合征 (myelodysplastic syndrome，MDS)转白1例]。急性淋巴细胞白 血病(acute lymphocytic leukemia，ALL)患者20例。骨髓增殖性 疾病7{歹q(ivDs 3例、真性红细胞增多症2例、原发性血小板增 多症2IyKJ)，慢性粒细胞白血病(CML)14{YlJ(包括l 0例慢性粒细胞白血病慢性期患者、4{歹lJ慢性粒细胞白血病急变期患者)，23例正常人作为正常对照。采用半定量逆转录．聚合酶链反应 (simi—quantify reverse transcription polymerase chain reaction， RT-PCR)方法对AL患者、CML、MPD患者和23例正常对照的 骨髓进行SHP一1、SOCS3 mRNA水平的监测。通过细胞培养 的方法对白血病细胞株K562、和淋巴瘤细胞株T2进行传代培 养，并用不同浓度的甲基化抑制剂5杂氮一2脱氧．胞苷 (5-aza一2’deoxycytidine，5-aza—CdR)矛D三氧化二砷(As203)对其进行处理，用MTT法观察细胞活性及生长状况，并绘制生 长曲线；同时用RT-PCR方法检测实验组与对照组SHP一1、c—kit 基因的mRNA的表达水平。结果：l 在CML和AL患者组中的SIIP一1表达的阳性率与表达水平均明显低于正常对照组(p0．01)，而SOCS3表达的阳性率与中文摘要表达水平均明显高于正常对照组(矽O．os)。说明这两种基因 均参与了白血病的发病，但二者的作用机理不同。2 AML患者SHP．1的表达的平均水平为O．223，ALL患者表 达水平为0，两者的表达水平比较结果有显著性，p=0．001 SHP一1在CML慢性期和急变期比较，无统计学差异，P= O．280。SOCS3 rnRNA在急变期与慢性期的平均表达水平相比 较，无统计学意义，矽=0．454。3 在2l例缓解组中，SI-IP一1 mRNA的表达水平与正常对照 组相比表达水降低，有统计学意义，p=0．00；但表达高于初 治AL组(0．155)，且差别有显著性，p=0．00。在21例缓解 组中，SOCS3 mRNA表达平均水平与正常对照组相比表达水 平高，无统计学意义，p=0．065；其表达水平低于初治AL组(0．607)，且差别有显著性，p=O．00。4 SHP—l一组的缓解率低于SHP一1+组，进行X2检验分析，差别有显著性(X 2=14．880，p=O)。SOCS3+组的缓解率为41％，2高于SOCS3一的缓解率为28．6％，两组之间无显著性差异(x=0．215，p=0．643)。在SHP一1一SOCS3一双阴性组中，患者的 缓解率为14．29％，低于SHP一1+SOCS3+双阳性组的缓解率 66．7％，差别有显著性(矽=0．034)。SHP．1+SOCS3一组与双阳 性组之间的缓解率无统计学差异(p=O．696)、SHP．1一SOCS3+组与双阳性组之间的缓解率有统计学差异(p=O．000)。5 甲基化抑制剂5-aza—CdR和三氧化二砷对K562和T2细胞 株的增殖均有明显的抑制作用，存在明显的剂量依赖性和时 间依赖性。6RT—PCR显示，在原本不表达SHP—lmRNA的K562和T， 细胞中，经过低、中、高三个不同浓度的As203和5-aza—CdR中文摘要的处理后，SHP．1可以重新表达，而使原来高表达的c—kitmRNA的表达水平随之下降。当2．59mol／1 As203与O．5}，tmol／1、2 lamol／1 5-aza．CdR单独分别作用于K562时；当O．5 gmol／1 5-aza—CdR作用于T2时，两种细胞株均随着药物作用 时间的延长，SHP—lmRNA的表达水平升高，24、48、72h作用下的表达水平经两两比较有差异∞0．05)。当As203以 低中高浓度作用于K562时，三个浓度下，随着作用时间的 延长，c—kitmRNA的表达水平下降，经两两比较有差异(矽O．05)。7 当As203和5-aza—CdR以低中高浓度分别作用于K562时； 当As203单独作用于T2时，随着浓度的升高，SHP—lmRNA 的表达水平呈上升