百草枯中毒大鼠肾组织突变型p53和fasfasl的表达及促肝细胞生长素的治疗干预研究-expression of mutant p53 and fasfa sl in renal tissue of paraquat poisoned rats and therapeutic intervention of hepatocyte growth promoting factor.docx

???，飞飞.·r川·、沙仁U庐、，‘1U1111llllIIIIIIitlllIlltillIIIIl＼1800189目录中文摘要1英文摘要5英文缩写9研究论文百草枯中毒大鼠肾组织突变型P53和Fas／Fas．L的表达及促肝细胞生长素的治疗干预研究前言月lJ舌11ll材料与方法12结果21附图24附表35讨论38结论43参考文献44综述细胞凋亡与中毒性肾脏损伤47致谢60个人简历6l中文摘要百草枯中毒大鼠肾组织突变型氏和Fas／Fas-L的表达及促肝细胞生长素的治疗干预研究摘要目的：百草枯(paraquat，PQ)是目前世界范围内广泛使用的有机杂环类接触性除草剂。随着百草枯在我国农业上的广泛应用，PQ中毒也日趋增多。百草枯除草效果好，但对人畜均有较强毒性，可以经消化道吸收、皮肤接触及呼吸道吸入等途经进入体内，造成急性中毒，且中毒致死量小，病程发展快。百草枯进入人体后，可引起多个脏器的损害，其中以肺脏为主，其次是肾脏和肝脏。目前尚缺乏百草枯特效解毒剂以及有效降低毒物毒性的治疗手段。PQ主要以原形的形式经肾脏排出，因此了解其排泄机制及肾脏损伤机制非常重要。本研究通过观察大鼠PO染毒后肾组织病理变化、测定血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的变化，及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽一过氧化物酶(GSH．PX)的活力和丙二醛(MDA)的含量，并采用免疫组织化学方法观察肾组织中突变型P53蛋白、肿瘤坏死因子家族中Fas蛋白及其细胞表面受体Fas．L的表达，以及促肝细胞生长素(HepatocyteGrowth-promotingFactors，pHGF)对其表达的影响，进一步探讨急性百草枯中毒导致肾损伤的机制及促肝细胞生长素对PO中毒大鼠肾损伤的治疗作用。．方法；选用健康成年Spragne—Dawley(SD)大鼠180只，雌雄各半，随机分为3组：空白对照组(A组)60只、单纯染毒组(B组)60只、pHGF治疗组(C组)60只。B、C组PO(25mg／kg)腹腔注射染毒，A组等量生理盐水腹腔注射，之后，C组立即给予pHGFlmg／kg腹腔注射，每12h一次，最长用药时间为14天，B组给予与C组等量生理盐水腹腔注射。各组分别于1d、3d、5d、7d、10d、14d，取lO只大鼠，乙醚麻醉、腹主动脉取血处死，血液离心后取血清以备测定血BUN、Cr水平；留取左肾上极组织，制成10％肾组织匀浆测定MDA的含量，SOD及GSH．Px的活力；右肾用10％甲醛固定，行苏木精一伊红(hematoxylin．eosin，HE)染色观察病理学变化，免疫组化检测肾组织中P53、Fas／Fas．L的表达。结果：中文摘要1大鼠中毒表现：于染毒30min---2hB组大鼠即出现不同程度的中毒症状，包括精神、神经、呼吸、消化和泌尿系统等方面，主要表现为倦怠、嗜睡、烦躁、走路不稳、头颤；呼吸困难、进食水减少、血尿少尿甚至无尿。症状以1～3d最明显，3d后症状逐渐减轻。C组经pHGF治疗组中毒表现较B组减轻，呼吸困难改善，血尿减轻，少尿及无尿时间缩短。2血BUN、Cr钡,,tJ定(table1，Fig．53)A组：血BUN、Cr各时段均在正常范围内；B组：血BUN于第l天逐渐升高，1d、3d、5d各时间点与A组比较有统计学意义(PO．05)；5d后存活大鼠血BUN逐渐下降，7～14d时段逐渐恢复正常，与A组比较无统计学意义(PO．05)；C组：血BUN在1d、3d时段与A组比较具有统计学意义(PO．05)；5d、7d、10d、14d时段与A组比较无统计学意义(PO．05)；ld、3d时段较B组降低，有统计学意义(PO．05)；5d、7d时段较B组降低，但无统计学意义(PO．05)：三组Cr变化比较均无统计学意义(PO．05)；3肾组织匀浆SOD、GSH．Px及MDA变化(table2，Fig．54—56)3．1SOD活性检钡1](Fig．55．)．B组：染毒后1d后明显下降，之后缓慢升高，与A组相比，染毒后ld、3d--者差异比较有统计学意义(Po．05)，5d、7d时虽明显低于A组，但不再有统计学意义(P0．05)，10d、14d时间点SOD活力逐渐增高，与A组比较无统计学意义(PO．05)；．C组：促肝细胞生长素干预后SOD活力增加，染毒后1d、3d、5d、7d各时间点较B组升高，有统计学意义(P0．05)；10d、14d时间点与B组相比无统计学意义(PO．05)；与A组相比，1d差异有统计学意义(PO．05)，3d达高峰，之后维持在较高水平，5d开始呈下降趋势，3d、5d、7d、10d、14d与A组比较均无统计学意义(PO．05)；3．2GSH．Px活性检钡1](Fig．56)B组：染毒后1d和3d时段低于A组(Po．05)，5d及以后时段肾组织GSH