布拉酵母菌高生物量及高产海藻糖菌株筛选-screening of saccharomyces boulardii strains with high biomass and high trehalose yield.docxVIP

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  • 2018-06-28 发布于上海
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布拉酵母菌高生物量及高产海藻糖菌株筛选-screening of saccharomyces boulardii strains with high biomass and high trehalose yield.docx

布拉酵母菌高生物量及高产海藻糖菌株筛选-screening of saccharomyces boulardii strains with high biomass and high trehalose yield

学位论文独创性声明本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。论文作者签名:日期:年月日学位论文知识产权权属声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属山东轻工业学院。山东轻工业学院享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为山东轻工业学院。论文作者签名:日期:年月日导师签名:日期:年月日第1章绪论布拉酵母菌(Saccharomycesboulardii)是从印尼荔枝中首先分离得到的益生菌,广泛应用于抗击人类腹泻的药物中[1][2],它具有良好的耐热性,能在37℃相对高温的环境中生长繁殖。传统的生物化学鉴定和分子生物学鉴定方法都很难证明啤酒酵母菌和布拉酵母菌之间的差别,而最新的研究结果表明,存在于布拉酵母菌4号基因座的专一性序列(CAG)与普通酵母菌有很大差别,从而将它从啤酒酵母菌的其它种类中分离出来,并且确定为啤酒酵母菌的一个亚种[3]。布拉酵母菌生长温度范围比较宽,但在高温度条件下培养会改变布拉酵母菌的菌落形态,而在适宜温度下培养之后,其菌落形态仍可以恢复正常。随着养殖业的迅速发展,抗生素的使用越来越广泛,它的使用对畜禽疾病的防制起了十分重要作用,但于此同时,它也使动物肠道菌群的生态平衡遭到了严重破坏,致使菌群失调,有进一步导致肠上皮细胞的代谢调节水平和生理功能发生紊乱,从而使畜禽肠道内的条件致病菌和病原菌过度繁殖而造成肠道内感染性腹泻,梭状芽孢杆菌病就是很好的例证[4]。并且在腹泻后,又进一步加重肠道了菌群的紊乱程度而形成恶性循环,因此,在抗击肠道感染的过程中,选择可有效防治肠道菌群失调,而又无毒副作用的微生物活菌制剂,将成为畜牧业的研究热点。布拉酵母菌活菌制剂就是微生物活菌制剂的一种,其应用于畜牧业,可以十分有效地降低病原菌的数量以及相关毒素的浓度[5],并能增强菌群间的微生态平衡,还能刺激免疫系统,增强动物的免疫能力,其作为饲料添加剂的应用已得到包括中国、欧盟在内的世界上许多国家的认可。布拉酵母菌作为微生态制剂的一种,具有天然、无毒副作用、安全可靠、无残留等多重优点,同时它属于真菌类制剂,不被抗生素所降解,可以与抗生素同时使用,并能有效预防使用抗生素带来的菌群失调[6]。最新研究结果表明,布拉酵母菌还能抑制大肠杆菌内毒素的毒性作用,降低肠道内大肠杆菌活菌数量[7],有望用于防治鸡鸭类家畜的大肠杆菌病,所以布拉酵母菌作为一种新型微生态制剂,在畜牧业中必将有十分广阔的应用前景。我们在研究布拉酵母菌过程中发现其存活率差,在保藏和运输的过程中比较容易死亡,而海藻糖对包括布拉酵母菌在内的多种生物细胞具有神奇的保护作用。海藻糖(trehalose)是一种十分安全、稳定的天然性糖类,Wiggers在1832年将其从黑麦的麦角菌中首次分离出来[8],随着对海藻糖研究的深入,研究人员发现海藻糖广泛的存在于自然界中许多可食用的动植物以及微生物菌体内,比如在人们日常生活中食用的蘑菇类、海藻类、豆类、虾类、面包、啤酒及酵母菌的发酵食品中都有较高含量的海藻糖[9]。海藻糖是由两个葡萄糖分子以α,α,1,1-糖苷键构成的非还原性二糖,本身性质非常的稳定,科学家发现,沙漠植物膜叶卷柏在干旱时几近枯死,遇水后却又可以奇迹般复活;一些昆虫即使是在-80℃下仍然能够生存下来,就是它们身体中的海藻糖创造的生命奇迹[10]。因此,海藻糖在生物学界获得“生命之糖”的美誉[11][12]。海藻糖对生物体具有神奇的保护作用,是因为海藻糖在高温、低温、高渗透压以及干燥失水等恶劣环境条件下能稳定生物细胞膜和蛋白质的结构及功能,十分有效地保护细胞膜和蛋白质分子不变性失活,从而有效维持生命体的生命过程和特征。自然界中许多对外界恶劣环境表现出非凡抗逆性的生物,都与它们体内存在的大量海藻糖有直接的关系。而自然界中的如葡萄糖、蔗糖等其它单糖、二糖类物质,均不具备这一特殊而又神奇的功能[13]。这一独特的功能特性,使得海藻糖除了可以作为酶、疫苗、蛋白药物和其他生物制品的优良活性保护剂以外,并作为保湿类化妆品的重要组成成分应用于化妆品行业中,它还可以保持活细胞的生物活性。海藻糖的这些非凡的保护作用大大拓展了海藻糖作为天然食用甜味糖的功能,同时在利用海藻糖对生物细胞的保护作用,研究生物、微生物的抗逆性方面也将有新的进展。1.1布拉酵母菌的作用及其在医疗方面的应用由于肠道

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