不同浓度的sdf1,bfgf,il-8对骨髓间充质干细胞的趋化,增殖及分化的影响-effects of different concentrations of sd f1, bfgf and il - 8 on the chemotaxis, proliferation and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells.docxVIP

不同浓度的 SDF1，bFGF,IL-8 对骨髓间充质干细胞的趋化，增殖及分化的影响 摘 要目的：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs），研究比较趋化因子基质细胞衍生因子-1（stromal cell–derived factor-1，SDF-1）、碱性成纤维生长因子（Basic fibroblast growth factor ，bFGF)和白介素-8（interleukin-8，IL-8）在多个浓度下对 骨髓间充质干细胞的趋化作用；通过 MTT 法检测不同浓度的 SDF1， bFGF,IL-8 对 BMSCs 增殖活性的影响；实时荧光定量 PCR 检测不同浓 度的三种因子对 BMSCs 向牙周组织方向分化的影响。最终选择最佳因 子及浓度分别用于促进 BMSCs 的内源性归巢，增殖及分化，应用于牙周 组织的再生与修复。方法：抽取 SD 大鼠骨髓，分离培养 BMSCs。1.实验共分为 3 组：SDF1 组，bFGF 组，IL-8 组，每组因子浓度为 0 （对照浓度）、 10、50、100、200、400 ng/mL（实验浓度），利用 transwell 小室研究 不同浓度的 SDF1，bFGF, IL-8 对骨髓间充质干细胞的趋化作用，获得 3 种因子趋化 BMSCs 的最佳浓度。2. 实验共分为 3 组：SDF1 组，bFGF 组，IL-8 组，每组因子浓度为 0 （对照浓度）、10、20、50、100、 200、400 ng/mL（实验浓度），通过 MTT 法检测不同浓度的三种因子 对 BMSCs 增殖活性的影响；3. 相同浓度下的各因子作用于 BMSC 后，实时荧光定量 PCR（Real-time）检测 collagen type I （colⅠ）, Runt-related transcription factor 2(Runx-2), osteocalcin(OCN), alkaline phos- phatase(ALP)的基因表达。各因子的浓度设定为 20、50、100 ng/mL。结果：1. 与 0 ng/mL（对照浓度）组相比，3 种因子均可趋化 BMSCs（P＜0.05）； 50、100、400 ng/mL 浓度下，SDF1 对 BMSCs 的 趋化作用显著高于 bFGF(P＜0.05);200 ng/mL 浓度下，SDF1 对 BMSCs 的趋化作用强于 IL-8；SDF1 及 IL-8 对 BMSc 趋化作用的最佳浓度均为 100 ng/mL，bFGF 的最佳浓度为 200 ng/mL。2.第 1 天，第 4 天，10,20,50ng/ml 的 SDF1 对 细 胞 无 显 著 性 影 响 （ P ＞ 0.05 ）， 100,200,400ng/mlSDF1 反而抑制细胞的增殖；第 7 天 200,400ng/mL 的 SDF1 抑制细胞的增殖，其它浓度无显著影响。第 1 天，第 4 天时， 50ng/ml 的 bFGF 可显著促进 BMSCs 增殖（P＜0.05）,其它 浓度无显著 影响（P＞0.05） ；第 7 天，各浓度的 bFGF 对 BMSCs 的增殖均无显著 影响 。 各浓度 的 IL-8 对 BMSCs 的增殖 有显著 性抑制 (P＜ 0.05) 。 3.20ng/mL 浓度下，SDF1 可显著促进 col1，Runx2, ALP 的表达； bFGF 仅可促进 OCN 的表达；IL-8 可显著促进 Runx2,OCN ，ALP 的表达。 50ng/mL 浓度下，SDF1 可促进 col1，Runx2 的表 达； bFGF 均可显著 促进四种基因的表达，包括 col1，Runx2, OCN,ALP； IL-8 可显著促进 Runx2，OCN 的表达。100ng/mL 浓度时，只有 bFGF 仅可促进 col1 的 表达。结论：1. SDF-1、bFGF、IL-8 均可趋化 BMSCs，SDF-1 与 IL-8 的趋化效果更佳。2.SDF1 在低浓度时（10,20,50ng/mL）对 BNSCs 增殖 活性无显著性影响，而在较高浓度时反而抑制 BMSCs 的增殖；bFGF 在50ng/mL 时有促进 BMSCs 增殖活性的作用；IL-8 对 BMSCs 的增殖有抑制性作用。3.SDF1，bFGF,IL-8 在多个浓度均可影响 BMSCs 的分化， 且影响程度不一。其中，50ng/mL 的 bFGF 可显著促进 BMSC 向成牙周 组织方向分化。关键词：SDF1，bFGF,IL-8,骨髓间充质干细胞，趋化作用，增殖， 分化THE CHEMOTAXIS,PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION