白藜芦醇对恶性黑素瘤抗癌机制的实验分析-experimental analysis of resveratrol on anti-cancer mechanism of malignant melanoma.docxVIP

抑制剂（angiotension converting enzyme inhibitors，ACEI）除被广泛应用于高血压治疗外，还能抑制部分肿瘤细胞的生长。近期研究发现，白藜芦醇具有 ACEI 活性，提 示除了对肿瘤细胞增殖、凋亡影响外，白藜芦醇可能具有不同于其他抗肿瘤药物的特 性和机理。本实验初步探讨白藜芦醇对恶黑 AngⅡ/AT1R 表达的影响，进一步研究白 藜芦醇是否通过对 AngⅡ/AT1R 的调控抑制恶黑血管新生，以期为白藜芦醇对恶黑的 抗癌效应找到新的实验及理论依据。方法：放免法检测白藜芦醇对人恶黑细胞株 A375 细胞培养上清液中 AngⅡ的表达水 平的影响， RT-PCR 及 Western 印迹法检测白藜芦醇对 A375 细胞 AT1R 表达的影响。 体外小管形成实验检测白藜芦醇对 HUVEC 体外小管形成的影响，Western 印迹法检 测白藜芦醇对 A375 细胞 VEGF 及环氧合酶-2（COX-2）表达的影响。 结果：（1）100μmol/L 白藜芦醇作用 24h 后，人恶黑细胞株 A375 细胞培养上清液中 AngⅡ表达水平较对照组差异无统计学意义（P0.05）；（2）100μmol/L 白藜芦醇作用 24h 后，AT1R 在 A375 细胞 mRNA 及蛋白水平的表达较对照组明显降低，差异有显 著性（P0.05）。（3）白藜芦醇能明显抑制 HUVEC 管状结构的形成，100μmol/L 白藜 芦醇处理后，二维基质胶中 HUVEC 形成不完整的、松散的管状结构，小管的直径及 面积均明显低于对照组（P0.05）。（4）白藜芦醇能明显下调 A375 细胞 VEGF 及 COX-2 的表达，且呈量效及时效关系。与对照组相比，25μmol/L 白藜芦醇作用 24h 后，VEGF 及 COX-2 的表达即呈现下调（P0.05），100μmol/L 白藜芦醇作用 24h 后，则下调更 为明显（P0.01）；100μmol/L 白藜芦醇作用 6h 后即可下调 VEGF 及 COX-2 的表达（P0.05），24h 后更明显（P0.01）。结论：白藜芦醇参与对 MM 局部 RAS 的调控。其调控机制不是通过其 ACEI 效应， 而是通过抑制 AT1R 的表达来实现的。白藜芦醇能明显抑制血管生长因子 VEGF 及 COX-2 的表达并能明显抑制 MM 血管新生，提示白藜芦醇可能是通过对 AT1R 的下 调进而影响恶黑的血管新生从而发挥其抗癌效应。[关键词] 白藜芦醇；恶性黑素瘤；血管紧张素Ⅱ；血管紧张素Ⅱ受体 1；血管新生The study for the mechanisms of anticancer effect of resveratrol on malignant melanomaDoctoral Candidate: LI Dong-shengTutor: Prof. LI Jia-wenABSTRACTMalignant melanoma (MM) is a cutaneous tumor originate from human melanocyte. Despite recent new insights into the pathogenesis of MM, until now, effective drugs and means were to seek as for the patients with transferred MM in middle and terminal term. New biologically based drugs and therapies are therefore urgently needed. Resveratrol has recently attracted considerable interest because of its inhibitory activity on biochemical eventsassociated with many kinds of tumors development including MM. It was reported that resveratrol inhibts the growth of human malignant melanoma cells both cultured and fresh separated. However, the exact mechanism of the anti-tumor activity of resveratrol remains to be further determined. In the present study,