白藜芦醇对人tenons囊成纤维细胞增殖的影响及机制分析-effect and mechanism analysis of resveratrol on proliferation of human tenons capsule fibroblasts.docxVIP

目 录 缩略词表1 中文摘要3 Abstract 6 前 言 9 第一部分 白藜芦醇对人Tenons囊成纤维细胞增殖和凋亡的影响 14 结 果20 讨 论26 参考文献32 第二部分 白藜芦醇对人Tenons囊成纤维细胞中TGF-β基因表达的影响 36 结 果46 讨 论49 参考文献53 研究小结56 综 述 58 致 谢 77  缩略词表 缩略语 英文全文 中文全文 Res Resveratrol 白藜芦醇 HTFs human Tenons capsule fibroblasts 人 Tenon’s 囊成纤维细胞 GFS glaucoma filtration surgery 青光眼滤过手术 TGF-β transforming growth factor-β 转化生长因子-β CTGF connective tissue growth factor 结缔组织生长因子 bFGF basic fibroblast growth factor 碱性成纤维细胞生长因子 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 ECM extracellular matrixc 细胞外基质 MMC 5-FU MitomycinC 5-fluorouracil 丝裂霉素 c 5-氟尿嘧啶 FBS fetal Bovine Serum 胎牛血清 AO Acridine Orange 吖啶橙 EB Ethidium Bromide 溴化乙锭 cDNA complementary DNA 互补 DNA SDS Sodium Dodecyl Sulfate 十二烷基硫酸钠 DEPC diethylpyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 mRNA message RNA 信使 RNA DMSO Dimethyl Sulfoxide 二甲基亚砜 DMEM Dulbeccos Modified Eagle Medium Dulbeccos 改良 Eagle 培养液 PBS Phosphate buffered saline 磷酸缓冲液 MTT Methyl thiazolyl tetrazolium 噻唑蓝 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应  real-time PCR real time polymerase chain reaction 实时定量聚合酶链反应 EDTA Ethylenediaminetetra-Aceticacid 乙二胺四乙酸 RNA Ribonucleic Acid 核糖核酸 RT-PCR reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链反应  白藜芦醇对人 Tenons 囊成纤维细胞增殖的影响及机制研究 华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科 博士研究生：郑 恬 导 师：胡义珍 教授 中文摘要 第一部分 白藜芦醇对人 Tenons 囊成纤维细胞增殖和凋亡的影响 目 的：探讨白藜芦醇(RES)对行体外培养的人 Tenons 囊成纤维细胞(HTFs)的增殖 以及凋亡的影响，并比较在不同浓度白藜芦醇及不同作用时间时，HTFs 增殖和凋亡 的变化情况。 方 法：取青光眼患者术中切下的Tenons囊组织标本，组织贴壁法行人Tenons囊成 纤维细胞的体外培养，选取传代后第 3 代或第 6 代细胞。1.MTT比色法检测白藜芦醇 对HTFs增殖作用的影响: 分别用 10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml不同浓度的RES 干预体外培养的HTFs，12h, 24h, 36h,48h不同时间观察HTFs的增殖情况，并采用MTT 比色法检测HTFs的生长活性。2. 浓度为 10ug/ml，20ug/ml，40ug/ml，80ug/ml的白藜 芦醇对体外培养的HTFs作用 24h后，运用AO-EB、Hochest 33258 染色及Annexion V- 碘化丙锭双染色 流式细胞术检测细胞凋亡变化 。 结 果:1.MTT检测法结果显示：在浓度为 10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml 的白藜芦醇干预体外培养的HTFs，作用时间为 12h-48h 时，与对照组相比，细胞生 长受到显著抑制（p0.05），在该浓度和时间范围内，显示为时间和剂量依赖性，即 随着作用时间的延长和药物浓度的增加，其对细胞生长增殖的抑制程度也加强。浓度 为 10μg/ml，20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml的白藜芦醇作用 12h细胞抑制率分别为 9.62%， 18.86%，29.05%