比率荧光光谱仪测量细胞内游离钙离子浓度的分析-analysis of ratio fluorescence spectrometer for measuring intracellular free calcium ion concentration.docxVIP

摘要钙离子律荛蠡胞表第二信使据外源信号(激索、光、溢壤等环境利激)转交成胞内信号，导致一系列胞内事件的发生。大量的研究表明，Ca2+的信使功能是通过调控细戆蠹游离留+浓疫寒实巍懿。e≯堆号装产生和终止是缎脆袁ca2+增减、振荡的结果。因此测量细胞内的ca2+浓度是十分蘸要的。赫的荧光絷料的开发和戏像技术越发晨，极大豹促避了对懿戆内钙傣号传导途径的研究。本文前半部分简要回顾了ca2+荧光测量方法的历史与发展，介绍了ca2+作为细胞内第二信使的作用机理及对细胞内ca2+浓度进行荧光测量的原理并对我们的实验系统做了简洁的说唆。本文后半部分主要围绕蔫比率荧光光谱仪测量如胞内游离Ca2+的研究进行了以下工作：(i)建立了跑率荧毙党谱仪测量细施内游离钙离子浓度瓣实验系统；(2)建立了乳鼠心肌细胞原代培养的模型，并对培养细胞进行了细胞内ca2+浓度翡测萋。在心甄纲旎鳋液串如入粒(去耱瞥上艨素)君测缮蕊耀砖荧光强度明显升高，该现象符合NE的生理作用特点，因而表明我们所建立的测量麴匏内c矿浓度莉态变靶昀心魅缬戆实验系统是可行妁，该系统琵i；乏用于测量加入不阊药物后心肌细胞内ca2+浓度的变化状况，从生物医学的角度进行分析可以研究药物对细旎的作耀规理。(3)通过用Fura．2，AM对B16细胞内ca2+浓度的测量，确定了B16细胞的制备及荧光染料的载入方法；建立了用随机软件lmageMa8ter获取被测细胞的凿象及进行比率分析的穷法，月醚祝较件liX获取被测细胞酶荧光滏谱及进行比率分析的方法．关链词：ca2+、F瓣a．2琏M、心62絮胞、B16絮胞、莪羲心麓缎戆AbstractCalciumasasecondmessenger仃ansferSextemalsignal(ho肌one、light、temperaturea芏1domerenVironalstimulates)toi船acellularsignal，andinducesaseriesofintracellulara脑irs．Abund锄tresea“：hesindicatedtllatthemessenger如nctionofCa2+isreali勰dbya棚usting孤dco矗nllingt|leintraceIlularca2+concentration．Theproduce锄dendofCa2+signalresultedinadd．and．subtractandsu略eofintracellularCa2+．SonlemeasurementofintracellularCa2+concentrationisveryimportant．Thedevelopmentofnewnuorescencedyeandimagingtechniquehavegreatlypromotedmeresearch．mmefieldofcellularcalciumsignaltransductionpam．IntIlefirstpartofttlist11esis，也ehistory肌ddevelopmentof也eCa2+nuorescencemeasurementwereintmdllced，ttle铀ctionofCa2+asin的cellularsec叻dmessengerinnlesi驴al衄1sductionpathaIldt11et11eo拶ofcellularcalciumnuorescencemeaSurementwerepres∞ted狮dourexperimentsystemwasreported．ResearchonmeratiomemodofmeasuriIlgimracellularCa2+concentrationwitllrationuorescenceImageM船terwasreportedin协elaStch印terS，whichincludethefollowingS：(I)TheratioeXperimentsystcmofmea跗ingi嘶acellularCa2+concentration、^，ithrationuoresc明ceImageMast钉、】l，勰establiShed；(2)TheprimaryculturemodeofsuckliIlgmousecardiacmusclecellwasestablishedandtlleCa2+concefI仃ationinsucHingmousecardiacmusclecellwasmeasured．AReraddingNE(nDrepinephrine)tocardiacmusclecell，t11e辖ia毫ive羲uofesce魏cein豫lsi锣was蠡懋搬liei搀∞eased。襄lep魏