白血病细胞b7h2的表达与异基因造血干细胞移植gvl效应的关系研究-relationship between expression of b7h2 in leukemia cells and gvl effect of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation.docxVIP

第二军医大学博J二论文 白血病细胞B7．H2的表达与异基因造m干细胞移植GVL效戍的关系研究白血病细胞BT-H2的表达与异基因造血干细胞移植GVL效应的关系研究摘要T细胞在双信号的诱导下才能完全被活化。第一类信号为TCR与APC表面的MHC 限制性的抗原分子结合而相互作用，但是仅有这一类信号T细胞不能产生适当的细胞 因子，也不能引起T细胞的增殖，并常引发细胞的凋亡。T细胞功能的完全发挥，还 需要共刺激分子的参与，例如T细胞上CD28家族受体CD28、CTLA一4等与APC细胞上 的配体CD80、CD86相结合，完成T细胞的活化，从而实现T细胞对肿瘤细胞的免疫 作用。ICOS是CD28家族成员的之一，仅表达在活化T细胞及记忆T细胞上。其配体 B7H2生理状态下低表达在B细胞、DC细胞等APC细胞上。最近研究发现，B7H2在急 性髓细胞白血病等血液系统肿瘤细胞上有～定表达，且与差的预后密切相关。目前理论上认为，ICOS—B7H2是以Th2免疫为主的一对共刺激分子，阻断这一通路会造成 免疫向Thl倾斜；Thl类型的细胞因子(TNF．Q和IFN．Y)对肿瘤细胞起抑制作用， Th2类型细胞因子(GM．CSF和IL．3)可以刺激肿瘤细胞的生长；也就是说阻断B7．H2 或许可以增强针对肿瘤特异性抗原的GVL效应(移植物抗白血病效应)。我们首先研 究了急性白血病患者肿瘤细胞上B7H2的表达情况，并对其与预后因素的相关性作了 分析；接着进行了异基因“混和淋巴细胞一白血病细胞反应”，探讨其对异基因淋巴细 胞细胞毒作用的影响；最后建立GVL模型，迸一步明确将小鼠白血病细胞进行B7一 H2基因沉默后对异基因造血干细胞移植GVL效应的影响。第一部分急性白血病患者肿瘤细胞上B7一H2的表达与预后因素的相关性研究目的研究急性白血病患者白血病细胞B7一H2的表达与预后的关系。方法对47例初发的急性白血病患者，应用流式细胞技术观察其白血病细胞上 B7-H2的表达情况，分析其与预后的关系。结果按急性白血病的预后因素，将47例急性白血病患者分为低危和中／高危两 类，低危组患者的白血病细胞上B7一H2的阳性率为0．04±0．03(n=24)，中／高危组 B7-H2的阳性率为0．15±0．07(n=23，P=0．0015)；在急性髓细胞白血病患者中，低 危组和中／高危组白血病细胞上B7-H2的阳性率为分别为O．05±0．03(n=12)和 0．16±0．09(n=16，P=0．0412)，在急性淋巴细胞白血病患者中，低危组和中／高危第二军医大学博：{：论文臼Jfn病细胞B7．H2的表达与异基冈造m干细胞移植GVL效应的关系研究组白血病细胞上B7-H2的阳性率为分别为0．04±O．03(n=11)和0．15+0．08(rl=8， P=0．0295)。在47例白血病患者中，B7-H2阳性(B7-H2阳性率≥10％)的病例占25．53％， 其中急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病B7-H2阳性的病例所占比例分别为21．42％(n=28)和31．57％(n=19)；B7-H2阳性患者较阴性患者中位生存时间明显缩短(P=0．0453)。第二部分小鼠白血病细胞系上B7一H2的表达及其对异基因淋 巴细胞细胞毒作用的影响目的检测小鼠白血病细胞系上B7一H2的表达情况，探讨其对异基因淋巴细胞细胞毒作用的影响。方法通过流式细胞术及实时定量PCR的方法检测小鼠白血病细胞上B7一H2的表 达及其胞内mRNA水平；选用小鼠淋巴瘤细胞株A20及红白血病细胞株FBL3作为靶细 胞，用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记靶细胞，再用碘化丙碇(PI)标 记DNA，筛选细胞膜已破坏的靶细胞。实验组靶细胞应用功能性单克隆抗体封闭B7H2。 效应脾细胞与靶细胞比例为50：1--5：1，共孵育时问为10小时，流式细胞仪收集 1000个靶细胞并测定被杀细胞的百分率。结果小鼠白血病细胞株FBL3、A20、P388、EL广4、L6565和YAC．1均有不同程 度的B7一H2的表达，其中前三者细胞株A20、FBL3、P388 B7一H2阳性率较高， 分别为83％、39％和21％；实时定量PCR的检测结果也证实了A20、FBL3、P388 胞内较高的B7一H2 mRNA水平。分别选择A20和FBL3作为靶细胞，检测其在不同 的效应脾细胞／靶细胞比例的条件下靶细胞被杀伤的情况，结果显示，实验组(封闭 组)和对照组两组细胞随着效应细胞所占比例的不断升高，效应细胞对靶细胞的杀伤作用越来越强；在效靶比为10：l、20：1、30：l时，阻断肿瘤细胞上的B7一H2， 可以明显提高效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，两组的差别具有统计学意义(尸 0．05)；效靶比例过高，至40：1、50：l时，或过低，至5：l时，阻断肿瘤细