哺乳动物细胞质膜及乳腺癌变蛋白质组研究-study on mammalian cytoplasmic membrane and breast cancer proteome.docx

中英文摘要一共鉴定了122个非冗余蛋白质，其中质膜或质膜相关的蛋白质占55％，这比例明显高于我们用其它方法富集的质膜蛋白质的比例。另外，我们对鼻咽癌细胞系质膜蛋白质组进行了系统的研究。鼻 咽癌是广泛发病于东南亚和我们南方的一种恶性肿瘤。本文首先对其细胞系 一HNEl的表面(外周、整合和全质膜)蛋白质进行拓扑学分析。采用2DE—Ms／Ms，1DE—Ms／Ms，以及“shotgun”三条技术路 线。一共鉴定了856个非冗余蛋白质。这些蛋白质有46％的具有结合 活性，13％的(112个)存在于信号通路中。通过差异蛋白质组数据 库(DEPD)搜索，发现了191个蛋白质与癌症相关。此外，将我们的 数据放入Binding数据库检索，利用Pajek软件分析，构建了一个含 有600对相互作用的网络，其中185个蛋白质来自我们鉴定的。此外 我们对不同分化程度的鼻咽癌细胞系cNEl和cNE2的质膜蛋白质进行 差异研究。用percoll密度梯度离心法纯化细胞膜，点印迹法检测。 提取的蛋白质采用2DE州s／Ms技术路线分析，13个差异蛋白质得到 了准确鉴定。其中4个通过western blot得到了证实。3个通过实 时RT—pcR分析，其蛋白质表达与mRNA的表达一一致。这些差异蛋白质 的功能涉及细胞分化，代谢等。这些表达谱和功能蛋白质组的研究将 有助于我们对鼻咽癌的理解。此外我们还进行了乳腺癌变的差异蛋白质研究。研究表明：雌激 素和雄激素对促进乳腺上皮导管和小泡癌变具有协同作用。为了了解 其分子机理，我们用雌二醇(E2)和睾丸酮(DHT—B)处理FVB小鼠7 个月。切片发现：与没有处理的对照鼠相比，乳腺导管与小泡发生了 癌变。我们对这些癌变鼠乳腺进行差异蛋白质组研究，采用2DE—Ms 的技术路线，一共鉴定了25个差异蛋白质，包括与激素刺激，细胞分 化以及信号传导相关的蛋白质。为了证实这些差异蛋白质，对其中的 四个蛋白质进行实时RT—PcR分析。总之，本项研究为质膜蛋白质组的研究提供了～系列的方法手 段，鉴定了与鼻咽癌细胞分化相关的质膜标记蛋白质以及乳腺癌变相 关的靶蛋白质。 关键词：细胞质膜，蛋白质组，鼠肝，鼻咽癌，乳腺癌Ⅱ中英文摘要ABSTRACTPlasma membrane (PM) constitutes the interface between cells and their external environment．The proteins embedded in this membrane work as the “doorbells” and “doorways of the cells，and are the targets of about 70％of all known drugs．For these reasons， proteomic analysis of the plasma membrane isyery iⅢportant for theoretical and appl ied cytology and pharmacology． However， due to the 10w abundance， high hydrophobicity and the evidently complexity of PM proteins， it is Very chal lenging to study．First， we used mouse／rat liver as material． and looked for the methods for PM proteome research． The liver is one of the most important organs in the body， probably second only to the brain in organ complexity． Therefore，proteomic analysis of 1iVer PM will be helpful to understand these physi0109y actiVities and treat liver disease． We isolated PM from mouse 1iVer by sucrose density gradient centrifugation．The optimized lysis buffer containing 4％CHAPS and 1％NP～40 wasobtained．The methods for integral membrane protein enrichmentwere analyzed and better methods 一chl