奥曲肽对sw480细胞wnt通路βcatenintcf及下游靶基因表达的影响-effects of octreotide on wnt pathway β catenin tcf and downstream target gene expression in sw 480 cells.docxVIP

目 录 目录1 缩略词2 中文摘要3 英文摘要5 前 言7 材料与方法9 结 果16 讨 论23 结论31 参考文献32 文献综述 37 攻读硕士学位期间完成、发表论文情况46 致谢47 缩略词 英文缩写 英文全称 中文名称 SS OCT somatostatin octreotide 生长抑素 奥 曲 肽 β-cat β-catenin β-连环蛋白 phosph-β-catenin phosphorylated β-catenin 磷酸化 β-连环蛋白 Ser serine 丝氨酸 Thr threonine 苏氨酸 TCF T cell factor T 细胞因子 LEF lymphocyte enhancer factor 淋巴增强因子 cAMP Cyclic Adenosine monophosphate 环化腺苷酸 E-cad E-cadherin 上皮钙粘蛋白 PI3-K phosphatidylinositol 3 kinase 磷脂酰肌醇(-3)激酶 PBS phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲溶液 MTT methyl thiazolyl tetrazolium 甲基噻唑基四唑 IR inhibition ratio 抑制率 DMSO dimethyl sulphoxide 二甲基亚砜 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠聚 polyacrylamidegel electropheresis 丙烯酰胺凝胶电泳 PVDF polyvinylidene difluoride 聚偏(二)氟乙烯 PMSF phenylmethansulfonyl fluoride 蛋白酶抑制剂 APS ammonium persulfate 过硫酸胺 Tris tris-(hydroxymethyl) aminomethane 三羟基甲基氨基甲烷 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 TEMED N,N,N´,N´-tetramethyl-ethlene diamine 四甲基乙二胺 TBE Tris/borate/ EDTA(buffer) Tris/硼酸/EDTA 缓冲液 奥曲肽对 SW480 细胞 Wnt 通路 β-catenin/TCF 及 下游靶基因表达的影响 研 究 生：肖忠盛 导 师：梁庆模 教授 摘要 目的 研究不同浓度生长抑素类似物奥曲肽对结肠癌 SW480 细胞增殖的影响；通 过对结肠癌细胞 Wnt 信号通路 β-catenin/TCF-4 及下游靶分子 C-myc 和 CyclinD1 蛋白的研究，探讨奥曲肽对 Wnt/β-Catenin 信号通路的影响及作用机制，进一步 阐明生长抑素抗肿瘤作用机制。 方法 以人结肠癌细胞系 SW480 为实验对象，采用 MTT 比色法测定不同浓度奥曲 肽对 SW480 细胞增殖的抑制作用；应用 Western blot 法分析不同浓度奥曲肽对 SW480 细胞核中 β-catenin 、TCF-4 及 Wnt 信号通路下游靶分子 C-myc、CyclinD1 蛋白表达的影响。 结果 1. 奥曲肽能抑制 SW480 细胞的增殖，并在 10-10 M -10-8M（mol/L）浓度范 围内呈剂量依赖性，在 48 小时内呈时间依赖性。奥曲肽在 10-8M 时抑制作用最 强（P＜0.01），10-11M 以下对细胞增殖无抑制作用； 2. Western blot 检测结果显示：奥曲肽（10-6、10-8、10-10M）对 β-catenin 蛋白表达有明显抑制作用，与对照组比较有显著性差异（P0.01）； 3. Western blot 检测结果显示：奥曲肽（10-6、10-8、10-10M）对 Tcf-4 蛋白 表达有明显抑制作用，与对照组比较有显著性差异（P0.01）； 4. Western blot 检测结果显示：奥曲肽（10-6、10-8、10-10M）对 C-myc 蛋 白表达有明显抑制作用，与对照组比较有显著性差异（P0.01）； 5. Western blot 检测结果显示：奥曲肽（10-6、10-8、10-10M）对 CyclinD1 蛋白表达有明显抑制作用，与对照组比较有显著性差异（P0.01）； 结论 1．奥曲肽能抑制结肠癌细胞的增殖并在一定范围内呈浓度与时间依赖性。 2. 奥曲肽能抑制结肠癌 SW480 细胞核内 β-Catenin、TCF-4 及 Wnt/β-Catenin 信号通路下游靶分子 C-myc、CyclinD1 蛋白的表达。 3．奥曲肽能抑制 Wnt/β-catenin 信号传导通路。奥曲肽对 Wnt/β-Catenin 信 号通路的抑制作用可