白藜芦醇对trail诱导人肝癌细胞smmc7721凋亡的影响及其机制的研究-effect of resveratrol on trail - induced apoptosis of human hepatocellular carcinoma cell line smmc 7721 and its mechanism.docxVIP

中文摘要究成为热点。研究还发现，TR触L的耐药机制是多层次的， 存在肿瘤细胞的个体差异性，早期认为细胞对TRAIL敏感 还是耐受，与细胞表面T凡UL受体的表达和分布有关。但 随着研究的深入发现，凋亡通路胞内水平的调节比受体水平的调节可能起着更为重要的作用。抑制凋亡的因子ⅢP、XIAP、生存素(suⅣivin)、Bcl．2等，促进凋亡的因子 caspase．8、Smac、Bax等，另外还有具有双向调节作用的 NF．KB，可能都与肿瘤细胞对T凡UL诱导凋亡的敏感性有 关。suⅣivin是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族成员，在几乎所有恶性肿瘤中均有高表达， 而在分化良好的正常组织却无表达，surVivin具有抑制细胞 的凋亡和影响细胞分裂的双重作用，研究认为survivin在肝 癌中的高表达与其凋亡受阻有关。白藜芦醇(resveratrol，Res)是广泛存在于葡萄、花生和 多种药用植物中的一种多酚类化合物，最新研究指出白藜芦 醇作为一种低毒的天然药物，能够通过阻滞细胞周期和诱导 细胞凋亡两种途径来抑制细胞增殖，提示其在临床治疗增殖 性疾病甚至肿瘤上具有广阔的前景。近来国外有人发现了白 藜芦醇这种肿瘤化学预防剂的一种新奇功能，即对TRAIL 诱导肿瘤细胞凋亡的强大的致敏作用，但其具体的分子机制尚未完全阐明。目前，国内外关于白藜芦醇对删L诱导肝癌细胞凋亡的影响的研究尚未见报道。本研究通过体外细胞培养和分 子生物学技术，观察TRAIL对肝癌细胞SMMC．7721的凋亡 诱导作用，并进一步探讨白藜芦醇对TmUL诱导肝癌细胞 凋亡的影响及其机制，为肝癌的治疗提供了新的思路。中文摘要目的：研究白藜芦醇对T凡uL诱导肝癌细胞 SMMC．7721凋亡的影响及其机制。方法：应用体外人肝癌SMMC。7721细胞培养技术，采 用流式细胞术(flow cytometry，FCM)、DNA末端原位标记(TUNEL)染色法检测TRML对肝癌细胞SMMC．7721的凋亡诱导作用以及白藜芦醇对删L诱导肝癌细胞凋亡的影响；采用Wrestern Blot方法检测白藜芦醇对SMMC．7721 细胞Survivn表达的影响。结果：①TR鲥L对SMMC。7721细胞的凋亡诱导作用： 流式细胞术检测100ng·mLJTRAIL作用24h后， SMMC．7721细胞的凋亡率为8．55％±1．46％，培养基对照组 凋亡率为3．02％±0．17％，两者比较有统计学意义，PO．01； TUNEL染色法检测经100ng·mL-1TR AIL处理24小时后，细 胞凋亡指数与对照组相比增加，PO．01。②白藜芦醇加强TRML诱导SMMC．7721细胞凋亡， 并且这种作用呈剂量依赖关系。流式细胞术检测： 5毗mol·L．1、10Q肛m01．L-1白藜芦醇与100ng·mL．1TR AIL合用 处理24小时后，SMMC．7721细胞的凋亡率分别为 20．72％±1．33％、27．19％±1．43％，与单用100ng·mL-1TR触L 处理组比较有统计学意义，PO．01；2靴mol·L．1白藜芦醇与 100ng·mL‘1TRAIL合用诱导的细胞凋亡率与单用100ng．mL-1TR甜L处理组比较差别无显著性，PO．05。 TUNEL染色法检测：经5毗mol·L_1、10毗mol·L-1白藜芦醇 与100ng·n止1TRAJL合用处理24小时后，SMMC．7721细 胞凋亡指数与单用100ng．mL。1TRAIL处理组比较显著增加， P0．0】。中文摘要③白藜芦醇可能通过下调生存素(Sun，ivin)的表达加 强TRML诱导SMMC．7721细胞凋亡。Wrestem Blot测定结 果显示，在16．5kD的位置出现一条杂交带，43kD处出现内 参照B．actin的特异条带。经光密度测定分析显示：2靴mol·L-1 白藜芦醇处理组Survivin／B．actin的值与培养基对照组相比 无统计学差异，PO．05；5吮mol·L．1白藜芦醇处理组、 10吮mol·L-1白藜芦醇处理组SuⅣivin／B．actin的值与对照组 相比降低，PO．01；10吮mol·L．1白藜芦醇处理组Survivin／B．actin的值与5吮mol·L．1白藜芦醇处理组比较降低，有统计学差异，PO．01。结论：本研究表明，T融UL对SMMC．7721细胞有凋亡 诱导作用；白藜芦醇对TR触L诱导人肝癌细胞SMMC．7721 凋亡有致敏作用，并且这种作用呈剂量依赖关系；其分子机 制可能与下调凋亡抑制因子SuⅣivin的表达有关。关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；白藜芦醇； 细胞凋亡；肝细胞癌；生存素英文摘要The study of the effect