白藜芦醇对颞叶癫痫大鼠不同发作时期海马神经元glur6和gabaar-α1表达量的调节作用-regulation of resveratrol on glur 6 and gabaar - α 1 expression in hippocampal neurons of temporal lobe epilepsy rats during different seizure periods.docxVIP

英文缩略词表 英文略写 AP 英文全名 Anteroposterior 中文名 前囟后 ML Mediolateral 中缝旁 DV KA TLE Res PMSF AP Dorsoventral kainic acid temporal lobe epilepsy Resveratrol phenylmethylsulfonyl fluoride Ammonium persulfate 硬脑膜下 海人草酸 颞叶癫痫 白藜芦醇 苯甲磺酰氟 过硫酸铵 TMEMD SDS Glu Gly GABA MFS Tetramethylethylenediamine sodium dodecyl sulfate glutamic acid Glycine gamma-aminobutyric acid mossy fiber sprouting 四甲基乙二胺 十二烷基磺酸钠 谷氨酸 甘氨酸 γ-氨基丁酸 苔藓纤维发芽 DG EEG EP CPS dentate gyrus Electroencephalogram Epilepsy complex partial seizure 齿状回 脑电图 癫痫 人类复杂部分发作 IPSP inhibitory postsynaptic potential 抑制性突触后电位 LTP long-term potention 长时程增强 EPSC excitatory postsynaptic current 兴奋性突触后电流  摘 要 白藜芦醇对颞叶癫痫大鼠不同发作时期海马神经元 GluR6 和 GABAAR-α1 表达量的调节作用 目 的 应用脑立体定位技术在大鼠海马 CA3 中心区通过微量注射海人草酸（kainic acid），建立颞叶癫痫大鼠模型，以此模型为基础，从行为学和分子生物学两方面 观察模型动物于癫痫不同发作时期其发作频率及海马神经元 GluR6 和 GABAR-α1 表达量的变化，分析在颞叶癫痫发生、发展过程中大鼠海马神经元中 GluR6 和 GABAR-α1 表达量变化趋势以及白藜芦醇（resveratrol，Res）对该表达量变化的调 节作用，并评价其抗癫痫效果及作用机制。 方 法 1. 动物模型建立 雄性 Wistar 大鼠，体重 220 - 260 克，清洁级。水合氯醛(350 mg/kg, i.p.)麻醉动物后，用脑立体定位技术在大鼠海马 CA3 中心区（AP：- 4.0 mm，ML： - 4.4 mm，DV：3.8 mm）缓慢注射 KA 2.5 μl（0.4 μg/μl），约 10 min 注射完毕，留 针 3-5 min，缝合头皮。按 Racine 分级法对癫痫发作程度进行分级，选发作级别达 Ⅳ级以上的大鼠用于下一步实验观察。对照组大鼠在同样的脑区注射等量的生理 盐水。 2. 动物分组 按癫痫不同发作时期的行为学表现对实验动物进行分组，急性期（3 d）、平静期（14 d）、慢性期（60 d）。并根据实验要求将动物分为：生理盐水对照 组（NS 组）、癫痫模型组（KA 组）、KA + Res 治疗组（Res 组，15 mg/kg/d）。急 性期癫痫大鼠在首次急性大发作后即通过灌胃给药，每天 1 次，持续 3 d；静止期 和慢性期癫痫大鼠在首次急性大发作后即通过灌胃给药，每天 1 次，持续 10 d。 3. 行为学观察 将手术后的大鼠饲养于装有视频监控的动物房内，自由进食饮水， 自然采光，室温维持在 23 ºC± 1 ºC。每天监控 8 h，每周监控 5 d，对各组大鼠进 行连续视频监控，从行为表现上统计癫痫不同发作时期各组大鼠痫样发作的个体  数。 4. Western Blot 分析 7%水合氯醛经腹腔注射麻醉（ml/kg）大鼠后立即断头取脑， 冰上小心分离出海马，置于EP 管中经- 80 ºC 冻存。用脑组织蛋白裂解液提取海 马内全蛋白，利用BCA 法测蛋白浓度。取样本于10%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺 凝胶电泳后，蛋白80 V 恒压湿转入PVDF 膜上，5%脱脂牛奶室温封闭30 min，孵 一抗4 ºC 过夜，0.05% PBS-T 洗膜3×10 min，室温共同孵育二抗和HRP-GAPDH 抗 体1.5 h，0.05% PBS-T 洗膜3×10 min，暗室中ECL 显色后曝光。 5. 统计学分析 采用 SPSS 13.0 软件进行统计分析，组间差异使用单因素方差分析， 组内差异使用 LSD 法进行比较，实验数据以 x ± s 表示，p 0.05 具有统计学差异。 结 果 1. 行为学观察 颞叶癫痫大鼠模型的成功率达到 97.0%（62 / 64）。NS 组未见任何 形式癫痫发作；癫痫发作急性期：KA 组大鼠痫样发作率为 87.5%（