白香丹对pms肝气逆证模型大鼠不同脑区gaba_b受体亚基分布表达及海马erk12信号通路的影响-effects of bai xiangdan on gaba _ b receptor subunit distribution and hippocampal er k12 signaling pathway in pms liver-qi inverse syndrome model rats.docxVIP

Keywords:PremenstrualSyndromewithliver-Qiinvasionsyndrome；γ-AminobutyricAcidBReceptor；BaixiangdanCapsule目录引言1材料与方法31.材料31.1动物31.2药品及试剂31.3主要仪器31.4相关溶液配制42.方法72.1PMS肝气逆证模型大鼠的制备72.2大鼠脑组织固定及取材82.3石蜡切片制备82.4免疫荧光双标记实验92.5免疫荧光切片检测及数据分析102.6蛋白的提取和测定102.7免疫印记化学实验112.8统计方法13结果141.模型评价结果141.1大鼠宏观行为学观察141.2大鼠旷场实验得分142.免疫荧光双标记检测结果142.1大鼠不同脑区GABABR1和GABABR2的分布及同位点表达142.2各组大鼠额区、顶区、海马CA1、CA3和下丘脑区域相对荧光强度比较15讨论281.PMS肝气逆证模型大鼠的制备与评价282.实验脑区的选择292.1海马292.2额叶312.3顶叶312.4下丘脑313.GABAB受体在各脑区的受体定位分布及表达323.1GABAB受体结构概述323.2GABAB受体在中枢的分布333.3GABAB受体在中枢的表达335.干预药物365.1巴氯芬365.2白香丹376.问题与展望38结语40参考文献41综述51致谢70附录：缩略词表72致谢75引言情志病证是指以情志刺激为主要原因或诱因而发生的疾病，以及或发病后有明显的情志症状的病证，也包括由脏腑功能失调引起的表现出异常情志反应的疾病。经前期综合征(premenstrualsyndromes，PMS)又称经前紧张症,是当今临床常见的情志病证，指育龄女性月经前(黄体期)出现一系列情绪、心理和躯体症状、体征，诸如乳房胀痛、头痛、烦躁、紧张、焦虑等，以上症状月经来潮后自行缓解或消失，伴随月经周期规律性发作[1-2]。据统计，目前世界上约15-30%的育龄女性患有不同程度的PMS，3%-8%患有严重性PMS即经前烦躁障碍(premenstrualdysphoricdisorder，PMDD)[1-2]，并且近年来其发病率有逐年增高的趋势，本病严重影响妇女的身心健康及生活质量，为当今医学界所关注。中医学认为肝主疏泄,调畅气机,人的情志活动与肝之疏泄关系密切，PMS属于情志病症因此其发生与肝之疏泄息息相关。乔明琦等[3]经过流行病学调查显示PMS主要分为肝气逆、肝气郁两证,肝气逆是指肝气疏泄太过而产生，以功能亢奋为特点；肝气郁是指肝气疏泄不及而产生，以气机郁滞为特点，其中肝气逆是PMS主证,得到国外医学有关PMS临床分型的支持。根据临床经验,“易愤怒”和“易郁怒”的PMS患者所表现出的证候分别类似于肝气逆证和肝气郁证。因此，PMS肝气逆证与愤怒关系密切，其中易焦虑，烦躁，紧张是其主要情绪表现形式。PMS肝气逆证属于典型的情志病症。中医肝脏象研究表明，肝主疏泄与情志关系密切，而情志变化会引起大脑皮层功能性改变，主要表现为不同程度的神经内分泌功能紊乱[4-7]，其作用由GABAAR、GABABR和GABACR介导，其中GABABR在中枢神经系统内主要介导慢性抑制效应[8-10]，改变其亚基的功能易引起烦躁易怒和焦虑抑郁等情绪，多数研究资料也显示GABAB受体是治疗焦虑症的作用靶点[11]。功能性的GABABR是由含有两个亚基CABAB1(GBl)和GABAB2(GB2)的异源二聚体组成[12]，原位杂交的结果显示，GB1和GB2的mRNA广泛分布于哺乳动物的中枢神经系统中，这与通过配体结合实验显示的受体分布是一致的。在有GB1和GB2mRNA表达的神经元区域，两种mRNA在95％的区域有共分布[13]。文献报道，GABABR必须通过GBR1和GBR2两个亚基异构重整的二聚体实现其功能[14]，大量的实验表明，R2与R1结合后才能在细胞膜上形成一个功能完整的GABAB受体,产生可被检测的应答效应[15]。不过也有研究表明，单独表达的R2也可上膜并产生可被检测的应答。GABABR可介导ERK1/2信号转导通路，研究表明丝裂原活化蛋白激酶(mitogenacti-vatedproteinkinase,MAPK)通路是中枢神经系统内发挥重大作用的一条信号转导通路，细胞外信号调节蛋白激酶(ex-tracellularsignal-regulatedproteinkinase,ERK1/2)就属于MAPK家族中，ERK/MAPK信号通路目前研究较为广泛，其主要参与外界信号引起的神经元的一系列反应,主要体现在通过调节基因翻译和蛋白表达等影响突触重塑、轴突生长、长时程增强的形成和神经元的兴奋性等[16]。研究发现脑中枢多数脑区的神经元和胶质细胞都能参与ERK信号通路相关