百草枯致帕金森病模型的毒性机制及干预的实验分析-experimental analysis on toxic mechanism and intervention of paraquat-induced parkinsons disease model.docx

上海第=医科大学硕士学位论文霄鼙桔致糖金森病模整静毒性枫筒及干预盼实验研究中文摘要帕金森病(Parkinsonsdisease，PD)烂一种以黑质多瞪胺(DA)能神经元的豆藩装裘霉$喙理j簦(专够body,LBl彤藏隽霉理慧餮黪攀箩棼势餐嚣鍪李跫躐病。关子|『PD黝病因翮发病机制，目前认为是在遗传易感性和年龄老化的基础≯-。。一-，～邑宙子菝簸环境鬻素藩致。1-甲蒸．4一苯基-1，2，3，6．躐氢蘸瞧(MPTP){乍秀pD的危险因素已得到公认，但其仅存在于海洛因等毒品中，日常生活接触很少。酉荜秸是～种与1VLPTP结构类似的除草莉，，。泛糟于农、韭生产，研究显示哲草稿与PD发瘸密切相关，研究其致瘸机制对予预防和治疗PD具有黧要意义。目前对百草椭数病机制的认识，有体外实验驻示百萆枯可促进。一突触核蛋自(a—Synuclein，n—Syn)豢集，焉者与∞发病密切摆关；并且饺缨照内自交基产生增加。关于百草枯的作用通路，有学者认为魁通过中性氨基酸转运体的转运逶过蛊藤蘑簿(blood曲}a竦barrier，BB8)。本课题在此基础上首先利用酉草枯建立PD小鼠模型，检测对n-Syn旋达及结构的影响，并在踊脆承平上迸一步探讨百草稻与氧仡应激的猖荚性。为筵好说明西草枯邋过BBB番勺机制，我们比较了中性氨基骥干预前后PD模型中特异性病理特征的改变。目前有研究认为L-dopa通过同样机制通过BBB，结合不间剂量L-dopa对DA能李孛经元的双重{乍臻，我们强时分橱了不嘲剂量L-dopa对酉草桔毒性作用的影响及相关机制。本谋越分成四个部分第一帮分：利爝酉摹稿籁作PD，』、鬣穰鼙，稔潞黑质帮位DA能耱经元酶选择性丧失和a-Syn表达及结构变化。选用C57BL小鼠通过腹腔注射百章桔制作PD模型，应用免疫组化方法观察黑质部位DA能神经元交性；原位杂交、RT-PCR、免疫缀化、Western印迹法等分亳蜃ca-Syn波达量及结构变化!第三部分：从细胞及组织水平检测百草枯处理后线粒体功能及活性氧水平的上海篇二医科大学硕士学位论文改变。选爰Pel2缨魏，逶过MTT确定合适黪’蓦擎爨浓度掳度，测展罗丹甥、JC*l检溅线凝蒋爨骥及膜惑位改变，经DCFH-DA撼记刮期流式缨胞仪捡钡8细胞内活性氡永乎；剥用Western印迹法检测iNOS水乎变化。从组织水平直接观察线粒体形态改变。第_j三部分：观察L—valine、L．phenylalanine等中性氨基酸转运体底物能否拮抗百革枯诱导的a-Syn聚集和黑质DA能神经元变性的作用。利用百革枯小鼠模裂，分别在给予百草枯一定时间内腹腔注射L-valine等，利用百草桔抗体观察其在黑质部像的分布情况，j利用免疫组化、rWesternblot等方法检测a．sy矗聚集和慧质DA麓神经元交侄的改交惰况。第黼部分：裣湔不简剂量Ldopa封百草稿毒馁作用静影噙及英褶关橇麓。选糟不霹荆鬃L-dopa分别在注射百擎稽的一定时润内黢麓注瓣，烈矮免疫趣纯、Westernblot‘等方法鼹察黑袋DA糍李牵经元交蛙秘a，Sy珏躲聚集，莠鼹察聚簇状理一Syn缝L—dopa姆穿静后其聚纂的改变臻况。上述结聚表嘲：l、利用百草枯构建的PD小鼠模型可出现特异性的黑斌部位DA能神经元丧失和nSyn表达升高并且聚集。2、百草椭可使线粒体膜电位发生改变并破坏内膜，同时使细胞内活性氧水平、iNOS滋自水平增加，并且呈浓度依赖憔，提示百草}占敬病与线粒体受损及氧化应激有关。3、L-valine、L．phenylalanjne等友旋中性氨基酸i虿竞争往_}牵制再荤枯进入中柩粹经系统(CNS)，绉菝其毒矬作弼，蒸到鬣茨保护俸雳。4、低裁量熬￡。-dopa可竞争憋捧剃吾革结逶过BBB起副秘经器护作慰，巍渤量的L-dopa则馊淀粉掸包含体艇爨，馊维持在低凝体蛇毒性形式，表现如明显的毒牲作用；【关键谣】；酉莩桔；辫金森癌；a．Syn；氧化应激；盘齄羼瓣；左麓多墨2土籍籍二塞科发学礞士譬倥燕盅ExperimentalStUdyOiltheNeurotoXieityandP毒eventionirithemodelOfParkinson’sDiseas瓢IIlducedbyParaquatAbstractParkinson’sdisease(PD)isacoNmonprogressiveneurodegeneratIve’iij譬d紫?鼍姆豢鳞i跨罐警冀ej紫劳纂粤?l=iam如警‘$’、瘾u驹n爵够≯“曩j．_j、o__。+_一1一一，’?露{g}os￡}i矗t采王bath诲ay皴矗the如赫tibnOf：intra蠢euronatinclusions(calledLewybodies，LB)．要tiologieally，i々isconsideredwhethercasesof