第六章 转录3.pptVIP

第五节 转录产物的后加工 多数转录的初始产物并无生物学活性，必须经过进一步的加工才有生物学活性，特别是对于真核生物转录产物的后加工更为重要。 一、原核生物转录产物的后加工 原核生物mRNA的寿命非常短，这是原核生物基因表达调控的一种手段。原核生物的mRNA不需要进一步的加工就可以具有生物学活性，作为翻译的模板。 通过比较成熟的rRNA和tRNA与其原初转录产物，发现原核生物rRNA和tRNA的转录产物存在着后加工过程。 1. rRNA的后加工 原核生物有三种rRNA（5S、16S和23S），其基因（rDNA）与tRNA的基因（tDNA）混在一起，排列在一个操纵子（r r n）中。大肠杆菌有7个这样的操纵子。 r r n操纵子有两个启动子，第一个启动子p1位于16S rRNA序列上游300bp左右，可能是主要的启动子；第二个启动子p2位于p1下游110bp左右，该操纵子转录的产物为30S rRNA。 RNA酶Ⅲ负责p2转录产物的后加工。在缺乏RNA酶III的菌体细胞中，没有成熟rRNA出现，且30S rRNA产生堆积。 RNA酶Ⅲ在体外能够作用于30S RNA，产生p16和p25，可进一步转变为成熟的rRNA。 2. tRNA的转录后加工 原核生物tRNA的初始转录产物要经过多种加工处理后才能变成有功能的分子。 有两种类型的tRNA基因，一种具有CCA序列，称为Ⅰ型；另一种没有CCA序列，称为Ⅱ型。 Ⅰ型tRNA的CCA下游仍有一段序列， 需在酶的作用下切除。 Ⅱ型tRNA需在酶的作用下添加CCA序列。 原核生物的tRNA多为Ⅰ型。 tRNA的后加工是在多种酶的作用下完成的。 （1）RNA酶P（RNase P）是一种内切酶，能够使tRNA产生成熟的5’末端。 （2）RNA酶D（RNase D）是一种核酸外切酶，能够逐个切除tRNA 3’末端多余的核苷酸，使CCA暴露。当CCA末端产生后，会立即产生氨酰化而得到保护。 （3）tRNA核苷酸转移酶（tRNA nucleotidyl transferase） 该酶能够以ATP和CTP为前体，催化tRNA的3’端生成CCA。 该酶识别tRNA的空间结构，没有种属特异性。 （4）RNA酶Ⅲ负责切开间隔序列。 人们一直以为具有3’ poly（A）结构是真核生物mRNA的特征。在最近的研究中，发现原核生物的RNA转录后也有在3’端添加poly（A）的现象。 大肠杆菌的poly（A）聚合酶早在1962年就已经发现，但对于这种生物学现象还缺乏了解。 二、真核生物的转录后加工 真核生物转录后加工除了mRNA外，tRNA和rRNA也要经过后加工的过程。 有关真核生物tRNA的加工处理了解还不多，可能和原核生物有相似之处。 1. rRNA的转录后加工 真核生物有4种rRNA，即5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA和5S rRNA。其中前三者的基因组成一个转录单位，产生47S的前体，并很快转变成45S前体。 45S前体上有许多甲基化的位点，在转录过程中或转录后被甲基化。甲基基团主要是加在核糖上。 甲基化是45S前体最终成为成熟rRNA区域的标志。 真核细胞中rRNA的加工途径 (1) 切除5′端的前导序列； (2) 从41S的中间产物中先切下18S的片 段。 (3) 部分退火，形成发夹结构； (4) 最后修正。 目前还不清楚45S前体在剪切位点断裂后是否就产生成熟的末端，还是要经进一步的加工。整个加工过程需要蛋白质的参与，可能形成核蛋白体的形式。 rRNA的加工过程还需要snoRNA （small nucleolar RNAs ）的参与。 真核生物的5S rRNA是和tRNA转录在一起的，经加工处理后成为成熟的5S rRNA。 2. mRNA的转录后加工 在真核生物中，几乎所有的成熟mRNA有5’帽子（cap）结构，多数还有3’末端的poly（A）尾巴。这些结构都是在转录后经过修饰的结果。 （1）5’帽子结构 成熟真核生物的mRNA并没有游离的5’端，而是一种被称为帽子的结构。 真核生物的帽子结构可归纳为三种： m7GpppX为帽子0：即N7-甲基鸟嘌呤核苷酸成为帽子0 ； m7GpppXm为帽子1：原转录物第一个核苷酸的2’-O位上产生甲基化。 m7GpppXmpYm为帽子2：如果第一个核苷酸是A（大多如此）的话，则在A的N6位上还有一个甲基。有些真核生物的第二个核苷酸的2’-O位上还可以再产生甲基化。构成帽子2。 不同真核生物的mRNA可有不同的帽子结构，同一种真核生物的mRNA也常有不同的帽子结构。 帽子结构的作用： 为核糖体识别RNA提供信号 增加mRNA的稳定性 与某些RNA病毒的正链RNA的合成有关。 (2) 3’ poly(A)尾巴 多数真核生