固定化candidaantarcticab脂肪酶催化合成中碳甘油二酯和月桂蔗糖酯的研究-study on synthesis of medium-carbon diglyceride and lauryl sucrose ester catalyzed by immobilized candida lipase.docxVIP

摘要li imm，酬酬?lS9〓29摘要脂肪酸多元醇酣作为一种安全、稳定、高效的食品添加剂，其合成方法及用途已逐 渐得到国内外学者的研究与建视。本文采用固定化 Candida antarctica B 脂肪酶(Novozym 435)催化合成中碳甘油二酶和月桂酸庶糖酶，并考察了主要反应因素的影响，优化了其合成工艺。主要研究内容和结果如下:1. 以辛酸、甘油为底物，用固定化 Novozyme 435 脂肪酶催化直接酣化法合成辛酸甘 油二醋。实验发现熔剂的疏水性对甘油工酷的合成影响较大，高 log P 的石油酶有 利于产物中甘油二酣含量的提高;金崩离子在本体系中并不影响脂肪酶的催化活性: 不同的初始加水量对酶化反应的影响表现在反应初速度的变化，且加水量 5%甘油 (w/w)下初速度最大;在敞口面积直径 29 mm 的反应器中反应，体系酣化率最高， 且无需再加入 4A 分子筛脱水:另外合适的反应温度和底物摩尔比在 1提高辛酸转化 率及产物中甘泊的含量。经优化得间歇釜式反应器中辛酸甘油工醋合成的最佳条件为 n( 辛酸):n( 甘油)需 2:1 ，初始加水量5%甘油(W!í咐，加酶量 250 U/g 辛酸，敞口(d=29 mm) ，60 oC，反应10 h ，辛酸转化率高达94.21% ，产物中辛酸甘油工酶含量为45.07% ，其产率为43.76% 。另外发现微波辐射可加快辛酸与甘油的醋化反应速率达1.56 倍，但却无明显的促进辛酸甘油二酶生成的作用。从期望得到高辛酸甘油二酶 含量的目的来说，归j 歇釜式反应器的效率较低。2. 针对问歇釜式反应器低效率的问题，本文选择于填充柱反应器中以脂肪酶催化通过 直接酶化法合成辛酸甘油工酶，并带察了主要反应因素的影响。发现 65 oC 下辛酸 甘泊摩尔比 2，以200 U/g 辛酸的脂肪酶催化， 10%甘油(w/w)的初始加水量， 34 h-t 体积流速， 65 0C 反应 7 h ，串酸转化率最高可达82.30%，甘油工酶含量为77.26% ， 其产率为 65.33%。且脂肪酶可重复利用15 次并且不失活。这充分证明了填充柱反 应器比间歇釜式反应器更利于辛酸甘油工酷的合成。另外本研究结果是目前利用填 充柱式反应器得到的最佳结果，不仅产物中卒酸甘油工酶含量高，而且大大降低了脂肪酶的用量，显著降低了反应成本，为酶催化反应的工业化应用带来了更大的可 能性。3. 进一步考虑到原料的价格及反应的经济性，本文研究了脂肪酶催化卒努酸甘油二醋 (orcc)甘油解法合成中碳链甘油二醋。发现仅当溶剂为促溶剂叔丁醇时， orcc 转 化率显著增大，产物中辛樊酸甘油二酶的含量也明显提高;同时还考察了其它因素 对甘泊解反应的影响，最佳条件为 orcc 与甘油底物摩尔比为 2 ，初始加水量 4%(w/w ，甘油)，叔丁醉与甘油摩尔比为 2.1， Novozym 435 酶加入最 250 U/g orcc，65 0C 反应 24h ，orcc 转化率达 74.21% ，产物中甘油二醋含量为53.17%。另外首次引入微波辐射用于加快甘油解反应速度，发现微波辐射下的反应速度比常规加热下提高了1.89 倍，产物中甘油二酣含量显著增大。4. 本文初步探索了酶促合成月桂酸庶糖醋的研究。以股糖，月桂酸为成物，在不同条IIII摘要件下用固定化 Novo可m435 脂肪酶催化合成月桂酸庶糖酶，并通过薄层色谱法结合 质谱分析产物组成。通过考察备因素对醋化反应的影响，优化得最佳工艺条件为煎 糖与月桂酸底物比 1，叔丁醇2.92(w/w ，底物)， 0.2M 棚砂缓冲液(pH 9.l8) 4%底物 (w/w)，脂肪酶 1700 U/g 庶糖， 65 0C 下反应 24 h，月桂酸转化率达22.17% 。另外研 究了微波辐射对月桂酸庶糖酶合成的影响，发现反应 15 min 微波辐射相比于常规加 热，其反应速度可加快 2.16 倍，但随着时间的延长，微波效应略有减弱。关键词z 甘油二酶，月桂酸煎糖酶，酶化，甘油解，酶AbstractAbstractPolyol ester is a nonionic surfactant，and it attracts the considerable attention recently ， just for its safty，nutritional and multifunctional properties. 丁he enzymatic synthesis of diacylglycerol (DAG) has been reported widely; but a systematical comparative study is