通络醒脑泡腾片对AD大鼠学习记忆和海马胰岛素降解酶表达影响.docVIP

通络醒脑泡腾片对AD大鼠学习记忆和海马胰岛素降解酶表达影响 　　摘要 目的：探讨通络醒脑泡腾片对Aβ25-35海马注射拟痴呆大鼠学习记忆和海马胰岛素降解酶表达的影响，为其防治老年痴呆提供依据。方法：建立Aβ25-35海马注射痴呆大鼠模型，将造模大鼠随机分为模型对照组、安理申组（1.4 mg·kg-1）、通络醒脑泡腾片高、中、低剂量组（7.56，3.78，1.59 g·kg-1），另取海马注射生理盐水的大鼠为假手术组，10 mL·kg-1，每日1次，连续灌胃给药90 d，采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力，采用免疫组织化学和图像分析技术对大鼠海马胰岛素降解酶表达进行定量分析。结果：通络醒脑泡腾片能够显著缩短大鼠定向航行测试的逃避潜伏期，显著延长空间探索测试第一象限停留时间和减少第三象限停留时间，增加经过平台次数，与模型组比较有显著差异（P　　关键词 通络醒脑泡腾片；学习记忆；海马；胰岛素降解酶 　　收稿日期 2013-03-13 　　基金项目 国家“重大新药创制”科技重大专项（2013Z008）；四川省杰出青年学术技术带头人计划项目（2011JQ0014）；四川省学术和技术带头人培养资金项目（重点）；四川省“十一五”支撑项目（2010SZ0195）；四川省教育厅自然科学重点项目（12ZA041）；成都市产业发展技术支撑计划-高校院所应用基础研究项目（12DXYB321JH-002） 　　通信作者 *徐世军，Tel：（028E-mail：docxu@126.com 　　作者简介 张荫杰，Tel：（028E-mail：zhangyinjie88@163.com 　　阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease，AD）是一种与年龄密切相关的神经退行性疾病，发病机制不明，已经成为65岁及以上人群的第5位致死原因[1]。Aβ的沉积是目前公认为AD 的中心环节及始动因素[2]。AD患者由于Aβ产生和清除失衡，导致过多的Aβ聚集成可溶性寡聚体而产生神经毒性。因此抑制Aβ过多产生和清除寡聚化的Aβ便成为AD治疗的重要策略。“酶降解作用”在Aβ清除中具有重要作用，其中IDE是脑中最有效的Aβ降解酶之一[3-4]，故上调Aβ降解酶（如IDE），即通过增加Aβ从体内的清除达到重建Aβ代谢平衡理论上是AD治疗和预防的方法之一，但目前尚未见到相关报道。通络醒脑泡腾片由川芎等药组成，具有通络醒脑，解毒益智的作用，课题组前期研究表明，该制剂具有改善AD学习记忆功能、促进海马突触素表达、抑制海马CDK5和GSK-3表达等作用[5-6]，本研究从促进脑内Aβ清除的角度，考察了其对Aβ25-35致AD大鼠学习记忆能力及海马IDE的表达的影响。 　　1 材料 　　1.1 药物 通络醒脑泡腾片，4.5 g原生药/片，由本课题组自制，批盐酸多奈哌齐（安理申），卫材（中国）制药有限公司生产，批号100319A。 　　1.2 动物 SD大鼠，SPF级，3～4月龄，雌雄各半，体重（200±20） g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号SCXK（川）2008-24。 　　1.3 试剂 淀粉样蛋白片段（Aβ25-35），Sigma公司产品；SYP一抗：bs-0018M，兔抗大鼠IgG，北京博奥森生物技术有限公司；二抗、三抗和DAB显示试剂盒均由北京中山金桥生物有限公司生产。 　　1.4 仪器 DW-5大鼠脑立体定位仪（成都泰盟科技有限公司）；SAESHIN 90+102电动牙科钻（saeshin precision Co.，Ltd）；MT-200 Morris水迷宫（成都泰盟科技有限公司）；Image-Pro Plus 6.0图像分析系统（美国Media Cybernetics， Inc.）。 　　2 方法 　　2.1 模型制备及分组 Aβ25-35溶入0.9%生理盐水（终浓度为2 g·L-1），37 ℃恒温箱孵育72 h老化备用。参考文献制备模型[5-6]。将大鼠用0.3%戊巴比妥钠腹腔内麻醉（30 mg·kg-1，ip）后，备皮，将大鼠固定在脑立体定位仪上，用碘伏75%乙醇常规消毒头皮后，用无菌手术刀在大鼠头皮正中线处切开一长约1.5 cm纵行切口，暴露前囟，钝性分离皮下组织及骨膜，然后根据大鼠脑立体定位图谱，先在大鼠前囟后3.0 mm，右侧2.0 mm处用无菌牙科钻钻开颅骨，用5 μL微量进样器自颅骨开孔处进入大鼠右侧海马背部，进针深度3.3 mm，缓慢匀速注射5 μL 凝聚态Aβ25-35，注射速度为1 μL·min-1，于5 min注射完毕，留针2 min，缓慢撤针；同样方法在左侧海马部注射5 μL 凝聚态Aβ25-35，造成拟痴呆大鼠模型。术后缝合创口，消