白芍总苷对干燥综合征模型小鼠饮水量和唾液量及T细胞亚群影响.docVIP

白芍总苷对干燥综合征模型小鼠饮水量和唾液量及T细胞亚群影响 　　【摘 要】目的：探讨白芍总苷对干燥综合征模型小鼠饮水量和唾液量及T细胞亚群的调节作用。方法：将60只BALb/C小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、白芍总苷低、中、高剂量组和醋酸泼尼松组，除空白组外，其余各组均建立干燥综合征模型，观察白芍总苷对干燥综合征模型饮水量和唾液量小鼠血液中的T细胞亚群的影响。结果：白芍总苷各组均能不同程度增加干燥综合征模型小鼠唾液流量，以中、高剂量组效果显著，与醋酸泼尼松组相当（P 0.05）。白芍总苷各组及醋酸泼尼松组均能降低干燥综合征模型小鼠外周血CD4+T细胞及CD4+/CD8+T比值，以中、高剂量组及醋酸泼尼松组作用明显（P 　　【关键词】 干燥综合征；白芍总苷；饮水量；唾液量；T细胞亚群；小鼠 　　干燥综合征（sj?grens syndrome，SS）是一种以外分泌腺高度淋巴细胞浸润为特征的自身免疫性疾病，最常见的症状是口眼干燥。SS在中医文献中无相似的病名记载，目前多数学者将其归属中医学“燥证”范畴，气阴两虚、津血亏虚等是本病的致病因素，虚、疲、毒相互交结是本病的病理关键。目前，尚无根治性药物及方法，多采取替代及对症治疗以减轻口眼干燥等症状。白芍总苷（TGP）是白芍的主要有效成分，具有抗炎、镇痛、多途径双向免疫调节等作用[1]。有研究表明，TGP能改善SS患者口眼干燥症状[2]，但其作用机制尚不清楚。本课题组对TGP进行了一系列实验研究，现总结报告如下。 　　1 实验材料 　　1.1 实验动物 选择鼠龄为8周的BALb/C近交系小鼠60只，SPF级，雌雄不限，体质量20 g左右，购于重庆医科大学实验动物中心，合格证号SCXK（渝）2006104。严格遵循“3R”原则，实验动物饲养室自然光线，温度控制在18～19 ℃，湿度控制在40%～70%，动物自由摄食、饮水。实验结束以引颈法处死。 　　1.2 主要药物及试剂 TGP，宁波立华制药有限公司生产，生产批号060301；醋酸泼尼松，天津药业生产，生产批百白破疫苗，北京天坛生物制品股份有限公司生产，生产批号2006060402；弗氏完全佐剂，Sigma USA生产，生产批号019k8719-81-2； PBS缓冲液，博士德生物工程有限公司生产，生产批号AR0030；CD4、CD8试剂，晶美生物制药有限公司生产，生产批号FG260611。 　　2 方 法 　　2.1 分 组 将60只小鼠随机分成空白对照组、模型对照组、TGP高剂量组、TGP中剂量组、TGP低剂量组、醋酸泼尼松组，共6组，每组10只。 　　2.2 动物模型的建立[3] 对模型对照组，TGP高、中、低剂量组，醋酸泼尼松组小鼠分别进行造模：各取10只同种小鼠，于无菌条件下取颌下腺，匀浆后加PBS稀释到1 000 μg?mL-1，加入弗氏完全佐剂，调整浓度为500 μg?mL-1，以每只1 mL的总量于小鼠的尾根部多点注射免疫，同时于背部注射百白破疫苗0.5 mL。在造模后第5周处死模型对照组小鼠2只，通过病理形态学观察，模型小鼠颌下腺发现特征性淋巴细胞浸润、腺体萎缩等SS典型病理改变，表明造模成功。 　　2.3 药物剂量换算 TGP成人每日用量为1 200 mg， 　　参照人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值 　　表[4]，换算成小鼠用量180 mg?kg-1；醋酸泼尼松成人每日用量20 mg，换算成小鼠用量3.0 mg?kg-1， 　　一般以成人体质量为60 kg为基础计算。 　　2.4 给药方法 空白对照组正常饲养，不予任何药物；模型对照组予生理盐水灌胃；TGP高剂量组予TGP136 mg?d-1灌胃；TGP中剂量组予TGP 68 mg?d-1灌胃；TGP低剂量组予TGP 34 mg?d-1 　　灌胃；醋酸泼尼松组予醋酸泼尼松0.08 mg?d-1灌胃。 　　2.5 观察指标 　　2.5.1 小鼠饮水量的测定 每3天加水150 mL，3 d后称量水量，投入的水量分别减去剩余水量即为每3天每笼小鼠饮水量。 　　2.5.2 唾液量测定 灌胃2周后将无菌的脱脂棉球制成干重为5 mg的棉球，放入小鼠的后颊部， 　　5 min后取出，电子天平上称重。唾液分泌量（mg）=棉球湿重-棉球干重。 　　2.5.3 小鼠唾液腺T细胞亚群含量 小鼠眼眶取抗凝血2 mL，取20 μL CD4/CD8 FITC/PE标记抗体加入流式管底部，取100 μL EDTA抗凝的小鼠外周血加入5 mL流式管底部并轻轻振摇，使其与抗体充分混匀，室温避光孵育20～30 min，加入2 mL红细胞裂解液，混匀后避光放置10 min，溶解红细胞至液体透亮。将样品管以1 000 r?min-1离心5 min，充分倒去上清液，加入2 mL