减味寿胎丸对复发性自然流产RSA小鼠蜕膜中树突状细胞DCs表达预研究.docVIP

减味寿胎丸对复发性自然流产RSA小鼠蜕膜中树突状细胞DCs表达干预研究 　　【摘要】目的：研究减味寿胎丸对复发性自然流产（RSA）小鼠蜕膜中树突状细胞（DCs）表达干预。方法：建立成熟、完善的RSA小鼠蜕膜的DCs体外培养体系。检测正常妊娠和RSA小鼠蜕膜中CD83+、CD1a的表达，以及CCLl7和CCL22的表达，探讨DCs在母胎免疫耐受机制中的可能作用以及与URSA的关系。探讨寿胎丸对RSA小鼠对蜕膜DCs表达的影响，从而探讨中药对DCs影响母胎免疫耐受的干预机制。结果：RSA小鼠的蜕膜中CD83+、CD1a；CCLl7和CCL22表达与正常妊娠组比较，差异有统计学意义（P中国论文网 /1/viewhtm 　　【关键词】减味寿胎丸；复发性自然流产；树突状细胞 　　【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）01-0012-02 　　自然流产指妊娠在28周以前终止、胎儿体重在1000g以下者，发生率15%～20%。如自然流产连续发生2次或2次以上称为复发性自然流产（recurrent spontaneous abortion RSA），发生率约1%[1]。妊娠是一种成功的同种异体移植现象，胎儿胎盘作为母体半同种异体移植物和妊娠免疫识别单位，其成功有赖于妊娠母体的免疫耐受，这种耐受一旦被破坏，则导致病理性妊娠，如流产、妊娠期高血压疾病等。RSA已知的病因有染色体异常、生殖器官畸形、内分泌失调、感染、免疫、环境理化等。近代生殖免疫研究表明[2]，约50%～60%的RSA与免疫有关，RSA的免疫学病因日益受到重视。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物 雌性CBA/J小鼠，10周龄，体重20g，60只。雄性BALB/c小鼠，10周龄，体重20g，15只。雄性DBA/2小鼠，10周龄，体重20g，15只。由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号： No.44005900000741/ No.44005900000742。 　　1.1.2 药品与试剂 ①醇提+醇提后水提方法所提取的减味寿胎丸复方（菟丝子400g、桑寄生300g、续断300g分别制备复方醇提物和复方水提物，将两者合并既得减味寿胎丸复方总提物样品。②地屈孕酮片（达芙通）：荷兰Abbott Biologicals B.V，规格：10mgX20片 批号：344033。③小鼠可溶性CD1a、CD83、CD86（B7-2/sCD86）ELISA Kit.④小鼠胸腺活化调节趋化因子（TARC/CCL2、CCL17、CCL22）ELISA。 　　1.1.3 实验仪器 全自动血细胞分析仪（XE-5000 日本Sysmex公司）、放免Y测量仪（SN-695B 上海日环仪器厂）、酶标仪（Bio-TekELX-800奥林巴斯）、生物显微（CX21BIM-SET奥林巴斯）、超低温冰箱、电子天平、电热恒温水浴箱 、离心沉淀机、50ml烧杯、特制塑料筒（内径约3Cm），恒温照明灯、眼科镊、缝针、丝线、持针器、注射器、灌胃针头、解剖台、烧杯、试管、小动脉插管、小血管夹、微量加样器、胶头滴管等。 　　1.2 方法 　　1.2.1 RSA小鼠造模方法 将雌性CBA/J小鼠（英文名：CBA/J mouse；分类地位：脊椎动物门、哺乳纲、啮齿目、鼠科、鼹鼠属、小鼠种、CBA/J小鼠品系；具有可提供研究的活体动物；饲养条件：屏障系统；微生物学等级：SPF级；类别：近交系；品系描述：CBA/J小鼠是CBA/J品系小鼠的其中一个亚系，其携带有Pde6brd1突变，该突变基因可使小鼠幼年时就失明。CBA/J一般用于研究肉芽肿型实验性自动免疫性甲状腺炎。对饮食诱导的动脉粥样硬化有很好的的抵抗性，在小鼠年老时会逐步出现微弱的听力损失情况，肾小管间质病变概率较高。雌鼠可能有习惯性流产。应用领域为肉芽肿型实验性自动免疫性甲状腺炎 视网膜退化变性 习惯性流产 听力损失）分别与雄性DBA/2（1909年C.C. Little从因毛色而分离出来的品系培育而成，是最早的一个近交系小鼠，常用于肿瘤学、遗传学和免疫学等方面的研究）和BALB/c小鼠（BALB/c 是白变种实验室老鼠，与众多常用亚系一样，起源于小家鼠Mus musculus。从1920年它们在纽约诞生至今，BALB/c小鼠在全球研究机构繁衍了超过200代，广泛用于免疫学、生理学的动物实验。）合笼交配[1]，检出阴栓者计为妊娠第1天，分别建立反复自然流产模型30只与正常妊娠模型10只。 　　1.2.2 分组及给药方案 按妊娠顺序随机分为RSA模型组（A）、RSA达芙通组（B）、RSA减味寿胎丸组（C）、正常妊娠模型组（D），自妊娠第1天开始灌胃，分早晚两