叶下珠提取物对肝癌细胞抑制和对Bcl―2表达影响.docVIP

叶下珠提取物对肝癌细胞抑制和对Bcl―2表达影响 　　【摘 要】文本主要探讨叶下珠提取物对人肝癌细胞的抑制作用及其对Bcl-2的表达的影响。在倒置显微镜下利用利用MTT比色法观察体外培养的人肝癌细胞株（BEL-7404）在不同浓度的叶下珠提取物作用后的形态变化，通过这种方法来确定各种浓度下的叶下珠提取物对于肝癌细胞的抑制程度。同时制作爬片，利用细胞免疫化学法测定Bcl-2在细胞中的表达情况。结果显示叶下珠提取物对于肝癌细胞有抑制作用，且抑制效果在实验范围内随着药物的浓度增加而增强。并且，叶下珠提取物能够减弱Bcl-2在体内的表达程度。说明叶下珠提取物通过下调细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达，从而促进肝癌细胞的凋亡。 　　【关键词】叶下珠；提取物；BEL-7404；Bcl-2 　　【Abstract】The study mainly discusses the effects of Phyllanthus extract on human hepatoma cell line and its on the expression of Bcl-2. Under an inverted microscope observation using the MTT assay cultured human hepatoma cell line（BEL-7404） in different concentrations of Phyllanthus extracts morphological changes after the action， through this method to determine the concentrations of various leaf Phyllanthus extract the degree of inhibition of human hepatoma cells. While cells grow on cover slips production， determined using cell immunochemical Bcl-2 expression in cells. The results showed that Phyllanthus extracts inhibited the hepatoma cells， and the inhibitory effect within the experimental range increases with the concentration of the drug increased. And， Phyllanthus extracts can decrease Bcl-2 expression levels in vivo. Description Phyllanthus extract inhibited apoptosis by down-regulating gene expression of Bcl-2， thereby promoting apoptosis of hepatoma cells. 　　【Key words】Phyllanthus；Extracts；BEL-7404 cell；Bcl-2 　　据研究表明，我国原发性肝癌死亡率达到0.204‰[1]，是一种极易转移和复发的恶性肿瘤，严重的威胁着人们的身体健康。许多研究发现，癌细胞的产生与正常细胞中促进和抑制细胞发生凋亡的基因之间的平衡被打破，导致细胞不能启动正常的细胞凋亡程序有关.其中Bcl-2基因即为一种细胞凋亡的抑制基因[2]，其表达产物Bcl-2蛋白能与一种细胞凋亡促进基因Bax的产物――Bax蛋白发生结合，从而竞争性的抑制Bax自身所形成Bax-Bax二聚体，这种二聚体被认为能够促进细胞凋亡的的形成。叶下珠为大戟科植物，是我国传统的中草药，具有较好的保肝护肝作用。Blumberg博士[3]通过叶下珠对土拨鼠的肝癌的抑制作用实验表明其具有明显的抗肝癌作用。本实验通过叶下珠提取物对BEL-7404肝癌细胞的体外实验，观察其对肿瘤细胞的抑制作用及对肿瘤细胞内Bcl-2表达的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　细胞株：人肝癌细胞株BEL-7404购自上海南方基因公司。主要试剂：抗体bcl-2购自上海研生生化试剂有限公司，MTT、DMSO购自Amrisco公司，叶下珠提取物由湖南中医药大学药学院提供。DMEM购自上海江莱生物科技有限公司，胎牛血清购上海泛科实业有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 BEL-7404细胞的培养 　　以DMEM高糖培养基加入适量的胎牛血清，使其浓度达到10%，并加入青链霉素，取人肝癌细胞