乳腺癌组织中干细胞CD44+CD24―表型与预后关系.docVIP

乳腺癌组织中干细胞CD44+CD24―表型与预后关系 　　[摘要] 目的 探讨CD44+/CD24-表型与病理类型、临床病理特征的及乳腺癌预后生存情况的关系。方法 应用免疫组织化学CD44/CD24双染方法检测100例乳腺癌CD44/CD24双染的情况，分析CD44+/CD24-表型情况及其与病理类型、临床病理及生存情况的相关性。 结果 CD44+/CD24-细胞表型阳性患者和阴性患者在年龄，绝经状况，病例分级，临床分期，肿瘤直径大小，淋巴结转移状况，复发状况，雌激素受体（ER）与孕激素受体（PR）以及人表皮生长因子受体-2（HER2）等临床病例参数均差异无统计学意义（P0.05）。CD44+/CD24-细胞表型阳性组与阴性组中位生存时间比较发现两组生存时间无统计学差异（χ2=0.017， P=0.897）。结论 乳腺癌CD44+/CD24-细胞表型表达情况与乳腺癌生存时间无相关性。 　　[关键词] 乳腺肿瘤； CD44+/CD24-细胞； 免疫组织化学； 预后 　　[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）02（c）-0057-03 　　乳腺癌发病率占全身各种恶性肿瘤的7%～10%[1]，是女性最常见的恶性肿瘤之一。上世纪90年代以来，乳腺癌的发病率在我国以平均每年约3%的速度增长。研究表明，一小部分肿瘤干细胞（CSCs）存在于乳腺癌中，它们对化、放疗有抵抗性，并可再次形成肿瘤，可能是肿瘤复发的根源[2-3]。为此，研究者提出了肿瘤干细胞的概念。理论认为，肿瘤是由一小群具有无限自我更新能力的干细胞样细胞及由其产生的分化程度不均一的细胞团组成的病态“器官”。那一小群细胞具有自我更新、分化和形成肿瘤的能力，类似正常体细胞中的干细胞，故被称为肿瘤干细胞。目前提出的肿瘤干细胞学说认为，肿瘤组织中存在的干细胞影响肿瘤病人的预后。但乳腺癌肿瘤细胞中的干细胞表型CD44+/CD24-表型的多少与乳腺癌的病理类型、临床病理特征及乳腺癌预后的关系目前尚有争议。因此，该研究通过乳腺癌手术标本的常规病理切片，应用免疫组织化学检测其CD44/CD24双染的情况，探讨CD44+/CD24-表型与病理类型、临床病理特征的及乳腺癌预后生存情况的关系，为今后乳腺癌的诊断治疗提供有价值的参考，将100例乳腺癌患者的常规切片进行检测，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　将100例乳腺癌患者的常规切片，应用免疫组织化学检测其CD44/CD24双染的情况，分析CD44+/CD24-表型情况及其与病理类型、临床病理及生存情况的相关性。 　　1.1 一般资料 　　选取2005年9月―2010年10月间同仁医院病理科近100例乳腺浸润性导管癌病例，该病例均经病理组织学检查证实。术前均未接受过放疗和化疗。100例患者均为女性，年龄25～88岁，平均年龄59岁，查看所有常规HE切片，所有病例均由2位高年资病理医师复习切片，并按照2003年WHO乳腺和女性生殖系统病理学和遗传学分类标准诊断分型，选取出所含肿瘤成分较多的石蜡组织块。 　　1.2 实验方法 　　免疫组织化学CD44/CD24双染方法：标本切片常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，微波炉进行抗原热修复，在3%的H2O2中孵育10 min，用即用型封闭液孵育10 min后PBS液漂洗3次，然后将CD24一抗（工作浓度为1比75）和CD44一抗（工作浓度为1比50）混合物加入切片上，4 0C冰箱孵育过夜；第2天取出在37 ℃中孵育40 min后PBS液漂洗3次滴加生物素标记的第二抗体（CD44，CD24两种二抗等量混合）；湿盒中孵育30 min后PBS液漂洗3次，按试剂盒说明配好DAB显色液和AP-Red显色液进行显色；蒸馏水冲洗后进行苏木精复染，自来水冲洗2～3 min后放入PBS中返蓝，去离子水冲洗后用封片剂复盖组织、不加盖玻片，水平放置与50 ℃烤箱孵育30 min；为了证明CD44/CD24双染的可靠性，用CD44和CD24单染免疫组织化学做对照。 　　1.3 仪器与试剂 　　将选取的石蜡组织块用德国Leica 2235型切片机，设置3u厚度，常规切取白片，置62.9 ℃温箱备用。 　　1.4 结果判断标准 　　根据WHO规定，双重免疫组织化学检测CD44和CD24，CD44表达于细胞膜上呈棕黄色（DAB显色），CD24表达于细胞质中呈红色（PA-red显色）。双染结果细胞膜呈棕黄色无红色的细胞鉴定为CD44+/CD24-表型肿瘤干细胞。结果判断参照Honeth等的评定方法：阳性细胞≥1为（+）。免疫组织化学的结果是在光学显微镜OLYMPUS BX51型及Leica DMLS型下进行读片，然后根据标准鉴定得出结论（由两位病理医师分别阅片）。 　　1.5 统计方法 　　所有