运动结合NO清除剂对兔膝关节软骨缺损修复影响.docVIP

运动结合NO清除剂对兔膝关节软骨缺损修复影响 　　[摘 要]目的：研究运动结合NO清除剂对兔膝关节软骨缺损伤修复的影响。方法：将雌性实验用大耳白兔24只随机分为4组，分别于左股骨内侧髁和右股骨外侧髁钻孔造模，实验组NO清除剂及对照组NS注射。前者每日两次运动，每次1小时，后者圈养；12周后全部空气栓塞处死，分别取双侧股骨内、外侧髁标本HE染色、 软骨用safranin“O”染色、免疫组化及Proteoglycan特殊染色检测，取胫骨平台进行解剖显微镜下评分，修复后关节软骨行组织形态学观察和比较。结果：负重与非负重区损伤后修复的肉眼观察无明显差别；镜下观察、O‘Driscoll组织学评分、HE染色后Mankin评分及免疫组化均显示NO清除剂组优于圈养组（P 　　[关键词]运动 NO 负重 关节软骨 损伤 修复 　　中图分类号：Q954.65+7 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）27-0125-01 　　前言 　　关节软骨细胞为增殖能力低下的终末分化细胞，自身基质包裹在软骨陷窝内，无法主动参与修复，一旦损害修复非常困难。根据关节软骨功能，可将软骨划分为负重区和非负重区[1]，前者胶原密度、厚度、含量及张力明显优于后者，缺损后修复效果也不同。NO是体内重要的信使分子和效应分子，关节软骨破坏后，软骨细胞和滑膜在致炎因子的作用下均可产生NO，从而抑制软骨细胞增殖，促进软骨细胞凋亡，同时破坏软骨基质，影响缺损部位修复。NO由一氧化氮合酶（NOS）催化L-精氨酸而生成，是生物体内信使分子和效应分子，介导许多生物学现象。NO抑制软骨细胞对蛋白聚糖（PG）、胶原合成，促使其分解，这些变化导致关节软骨修复能力下降，增加软骨破坏，加速软骨退变。 　　NOS抑制剂[2]抑制NO的生成，软骨细胞对力学刺激敏感[3]。不同性质、频率及力量的刺激对软骨细胞代谢及基质蛋白的影响也不同。持续稳定的压力和循环变化的力学刺激对软骨细胞代谢和基质成分的影响也不同[4]，对其作用效果研究较少。 　　1.材料与方法 　　1.1 实验动物 　　健康雌性实验用大耳白兔24只，平均4月龄，体重1.5kg±0.4kg，分笼喂养，喂食及饮水符合实验动物标准。每周测体重1次，适应性喂养2周后开始实验。 　　1.2 研究方法 　　（1）实验动物分组 　　（2）动物关节软骨损伤模型制作 　　（3）标本采集 　　（4）标本的处理 　　（5）统计学分析方法 　　2.实验结果 　　2.1 外观及体重的变化 　　各组实验动物术后3 天内伤肢不负重，1周内跛行，1周后逐渐恢复正常步态。伤口无感染，愈合良好。非运动组12周后皮毛灰暗，活动迟缓，反应迟钝；运动组皮毛光洁，一般状况及活动能力与实验前相同，关节活动自如；各组饮食及体重无显著性差异。 　　3.讨论 　　NO为无色气体难溶于水，具有脂溶性。由于带有自由基，化学性质非常活泼，与O2反应后形成有腐蚀性气体NO2。 　　NO广泛分布于生物体内组织中，为不稳定生物自由基，可透过生物膜扩散，对心、脑血管和神经、免疫调节等方面有十分重要的生物学作用。当体内内毒素或T细胞激活巨噬细胞和多核白细胞时，产生大量诱导型NOS和自由基，合成NO和H2O2，对杀伤入侵细菌、真菌等微生物及在炎症损伤方面起着重要作用。 　　激活的巨噬细胞释放NO通过抑制靶细胞线粒体三羧酸循环、电子传递和细胞DNA合成途径杀伤靶细胞。NO对邻近组织和NOS 细胞也有毒性作用，都与NO在局部的含量有着密切的关系。关节软骨上皮细胞损伤后，周围的炎性反应至自体免疫导致损伤的不愈合。NO不需任何中间机制就可快速扩散进入生物膜，将细胞产生的信息传递到周围细胞中。NO生成的自由基极易参与传递电子反应，加入机体的氧化还原过程中。分子的配位性使它与血红素和非血红素铁有很高的亲合力，取代O2和CO2的位置。NO清除剂-NO可以失去它附近的碱基而变成自由的原血红素-NO，使自由碱基自由地参与催化反应，自由蛋白质自由地改变构象，自由的血红素自由地从蛋白中扩散。三种变化中的任何一项或它们的组合，将在鸟苷酸环化酶的活化过程中起重要作用，从而弱化NO对缺损的关节软骨组织侵蚀。 　　理想的关节软骨缺损模型制做应是充分负重、无缺损及骨折危险的部位，且关节软骨能再生与修复及对不同结果进行分析。兔关节软骨缺损修复观察时间长短以其内在修复能力为标准，理想的修复特点是恢复正常关节软骨的体积、形态、结构和位置，产生新的组织，从而恢复关节功能。正常关节软骨的压力来自体重及肌肉收缩，包括动态压力与静态压力交替完成。周期性压力变化，有利于营养物质及组织液通过滑膜孔在关节内的交换，从而刺激软骨细胞代谢，促进软骨基质蛋白合成，减少关节内粘连，促进溶酶体酶和渗出物清除。