细菌内毒素检查法讲稿ppt课件.pptVIP

细菌内毒素检查法2008年12月 郑州;一、背景介绍;热原;细菌内毒素;细菌内毒素;C因子;细菌内毒素检查法反应机理;Boc-leu-Gly-Arg-PNA （鲎三肽）;细菌内毒素检查法定义： 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。; 细菌内毒素检查包括： 限量实验 凝胶法 半定量实验 可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。; ;细菌内毒素检查----------凝胶法 ;C因子; 37± 1℃下保温反应60?2分钟 当样品中细菌内毒素的浓度达到或超过鲎试剂的灵敏度时，凝集为坚实凝胶，为阳性，记为“+”。 当样品中细菌内毒素的浓度未达到鲎试剂的灵敏度时，不能凝集为坚实凝胶，为阴性，记为“—”。 ;2、凝胶法实验的准备;细菌内毒素标准物质 国家标准品 以内毒素国际标准品为基准标定效价 150600-200707 10000EU/支 工作标准品 以内毒素国家标准品为基准标定效价 150601-200862 120EU/支;细菌内毒素检查用水 用于复溶内毒素标准品、稀释内毒素及样品、溶解鲎试剂等 凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。 ;凝胶法鲎试剂 8个鲎试剂厂家 灵敏度0.5~0.03EU/ml 规格0.5ml、0.1ml等 ; 漩涡混合器 ; 适宜的恒温器 恒温水浴 恒温培养箱 干热恒温器 ;试验器械的要求 移液管（或刻度吸管、微量加样器及无热原吸头）、凝集管（10×75mm）、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、封口膜、计时器、75%酒精棉、剪刀、砂轮。 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在250℃干烤至少60分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。;试验器械的要求 若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。 试验操作过程应防止微生物的污染。;供试品溶液的制备 某些供试品需进行复溶、稀释或在水??溶液中浸提制成供试品溶液。 一般要求供试品溶液的pH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH值。 缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。 ;3、限值（L）的确定;3、限值（L）的确定;3、限值（L）的确定;3、限值（L）的确定;4、确定最大有效稀释倍数（MVD）;4、确定最大有效稀释倍数（MVD）;4、确定最大有效稀释倍数（MVD）;4、确定最大有效稀释倍数（MVD）;4、确定最大有效稀释倍数（MVD）;4、确定最大有效稀释倍数（MVD）;细菌内毒素检查----------凝胶法 ;鲎试剂灵敏度复核试验;鲎试剂灵敏度复核试验;鲎试剂灵敏度复核试验;鲎试剂灵敏度复核试验;坚实凝胶 阳性“+” ;未形成凝胶 凝胶不坚实 阴性“—” ;鲎试剂灵敏度复核试验;鲎试剂灵敏度复核试验;鲎试剂灵敏度复核试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验正式干扰试验;凝胶法干扰试验正式干扰试验;凝胶法干扰试验正式干扰试验;凝胶法干扰试验正式干扰试验;凝胶法干扰试验正式干扰试验;内毒素浓度;内毒素浓度;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法干扰试验;凝胶法 ----检查法凝胶限量试验;凝胶法 ----检查法凝胶限量试验;凝胶法 ----检查法凝胶限量试验;凝胶法 ----检查法凝胶限量试验;凝胶法 ----检查法凝胶限量试验;凝胶法 ----检查法凝胶限量试验;凝胶法 ----检查法凝胶限量试验;凝胶法 ----检查法凝胶半定量试验;凝胶法 ----检查法凝胶半定量试验;编号;凝胶法 ----检查法凝胶半定量试验;凝胶法 ----检查法凝胶