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实验操作中易错的几个问题 (1)材料的选取:菊花的组织培养实验中,应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝;月季花药的培养实验中,应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。 (2)外植体消毒:所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液,所使用的清洗液是无菌水。 (3)培养过程:在初期,菊花的组织培养需光照,月季花药的培养不需光照;而在后期均需光照。 (4)月季花药培养得到的并不都是单倍体植株:花粉壁发育成二倍体,花药发育成单倍体。 (5)花药开裂长出愈伤组织或释放出胚状体时,应及时转移到分化培养基上。 (2014·皖南联考)关于花药离体培养的说法中,不正确的是( ) A.接种的花药形成愈伤组织或胚状体后,要适时更换培养基,以便进一步分化成植株 B.对材料的选择最常用的是焙花青—铬矾法,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色 C.接种花药后一段时间内不需要光照,但幼小植株形成后需要光照 D.材料消毒时需先用酒精浸泡,然后用无菌水中清洗,再用氯化汞或次氯酸钙溶液浸泡,最后再用无菌水冲洗 答案 B 解析 一般通过镜检来确定花药中的花粉是否处于适宜的发育期,对材料选择最常用的方法是醋酸洋红法。 DNA和蛋白质技术 1.DNA与蛋白质在不同NaCl溶液中溶解度不同 2.比较细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR) 项目 DNA复制 PCR扩增 不同点 场所 细胞内 细胞外 能量 ATP提供能量 不需ATP提供能量 酶 解旋酶、DNA聚合酶 耐高温的TaqDNA聚合酶 是否有转录 伴有转录,产生引物 无转录,需加入 两种引物 特点 边解旋边复制,半保留复制 体外迅速扩增 循环次数 受生物体自身控制 30多次 缓冲液 不需要 需要人为控制 设备 无 严格控制温度变化的温控设备 相同点 原料 四种脱氧核苷酸 复制原理 严格遵循碱基互补配对原则 模板 DNA为模板 引物 都需要与模板相结合的引物 3.分离DNA、PCR技术、分离蛋白质三者比较 分离DNA PCR技术 分离蛋白质 实验 原理 DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同,且不溶于冷酒精 利用DNA热变性原理体外扩增DNA 依据相对分子质量的大小不同来分离蛋白质 实验 过程 选取材料→破碎细胞释放DNA→除杂→DNA析出与鉴定 变性→复性→延伸 样品处理→凝胶色谱操作 实验 结果 获得较纯净的DNA 获得大量DNA 相对分子质量不同的蛋白质得以分离 实验 意义 为DNA研究打下基础 解决了DNA研究中材料不足的问题 为蛋白质的研究和利用提供了原材料 1.DNA的粗提取实验 ①哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核,也没有DNA,不适于作DNA提取的材料,但却是提取血红蛋白的理想材料。②实验过程中两次用到蒸馏水;第一次目的是使成熟的鸡血红细胞胀破释放出DNA;第二次目的是稀释NaCl溶液。 2.PCR技术反应过程中控制不同温度的意义 (1)90℃以上时变性,双链DNA解旋为单链。 (2)50℃左右时复性,引物与两条单链DNA结合。 (3)72℃左右时延伸,Taq DNA聚合酶有最大活性,使DNA新链由5′端向3′端延伸。 A.PCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术 B.反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板 C.PCR技术中以核糖核苷酸为原料,以指数方式扩增 D.应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变 解析 理解PCR技术的原理是解题的关键。PCR技术是人工合成DNA的方法,原料是脱氧核苷酸而不是核糖核苷酸。 答案 C (2014·河北衡水一中高三期中)下列关于物质的提取和分离的说法,错误的是( ) A.分离纤维素分解菌时,培养基中的纤维素要用苏丹红染色 B.提取鸡血细胞DNA时,需在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 C.提取和分离血红蛋白以及血红蛋白纯度鉴定用到的方法有:吸水涨破法、离心法、透析法、凝胶色谱法、电泳法 D.分离细胞中各种细胞器可用差速离心法;验证DNA半保留复制时用同位素标记法和密度梯度离心法 答案 A 解析 理解物质的提取和分离方法和原理是解题的关键。分离纤维素分解菌时,培养基中加入的是能与培养基中的纤维素形成红色复合物的刚果红,而不是苏丹红染液。 植物有效成分的提取 不同的物质提取方法不同 不同物质的提取是根据其理化性质的不同来进行的,因此在提取物质时,应先确定该物质的理化性质,然后再选择适宜的提取方法进行提取。 (1)蒸馏法适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油,水蒸气蒸馏根据原料放置的位置可以分为水中蒸馏、水上蒸馏、水气蒸馏。水中蒸馏设备简单、成本低、易操作,而水上蒸馏和水气蒸馏时间短,出油率高。 (2)压榨法适用于含油量高的原料,主要用于提取柑橘类精油,如橘皮油、柠檬油、甜橙油等
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