棉花ghftl1基因的克隆 表达和功能初步研究-cloning, expression and function of ghf tl 1 gene in cotton.docxVIP

Cloning, Expression and Function Primary Analysis of GhFTL1 Gene in Cotton (Gossypium hirsutum L.) A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Natural Science By Dong rui (Biochemistry and Molecular Biology ) Dissertation Supervisor: Associate Professor Cui Bai-ming Huang Xian-zhong June, 2012 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除 文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。 有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学 位论文在解密后适用本规定。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 I I 摘要 开花是植物由营养生长向生殖生长的转变过程，而开花相关基因的表达是实现这一转变的基础。 FLOWERING LOCUS T (FT)基因是光周期途径调控植物开花时间中的一个关键基因，其编码的蛋白 质就是人们长期追寻的成花素。FT 蛋白在叶片中合成后，经韧皮部长距离运输到茎顶端分生组织， 和其下游基因相互作用，最终引起植物的开花。 目的：本研究克隆棉花的成花素类似基因 GhFTL1 并进行功能初步分析，为进一步阐述和完善植物 的开花分子机理提供一定的理论依据，并为棉花的分子育种奠定一定的基础。 方法： 棉 花 的 成 花 素 类 似 基 因 克隆采用 RT-PCR 结合 RACE 技术 ； 构建 植 物 表 达 载 体 p35S::GhFTL1/p35S::GhFTL1-GFP/pSUC2::GhFTL1-GFP，并通过花滴法转化野生型拟南芥；采用半 定量 RT-PCR 和 Real-time RT-PCR 对 GhFTL1 基因在棉花的不同组织和纤维发育不同时期的表达研 究；通过喷花法，将 p35S::GhFTL1 转化棉花。 结果：（1）从新陆早 33 中，克隆到了一个棉花成花素类似基因 GhFTL1(HM631972), cDNA 全长为 733 bp，开放阅读框大小是 525 bp，推测该阅读框编码 174 个氨基酸短肽。经氨基酸序列比对分析 发现 GhFTL1 含有区分 FT/TFL1 基因家族蛋白的关键氨基酸残基，且具有该蛋白家族的两个保守基 序。以上结果表明 GhFTL1 可能属于 FT/TFL1 基因家族中的 FT 亚家族成员。系统进化分析表明， 棉花的 GhFTL1 属于 FT-like 亚家族成员。（2）半定量 RT-PCR 和 Real-time PCR 结果表明：GhFTL1 基因在新陆早 33 的根、下胚轴、花瓣、真叶、子叶、纤维和胚珠中均有表达，但在子叶和胚珠中的 表达要稍高于其它组织。说明其可能是一个组成型表达的基因；GhFTL1 基因在纤维发育不同时期 均有表达，其中在开花当天的胚珠中表达量最高。（3）在相同的生长条件下，T1 转基因植株 p35S::GhFTL1 和 p35S::GhFTL1-GFP 的开花时间要比野生型明显提早开花。通过 PCR 检测，GhFTL1 基因已整合到拟南芥的基因组中。表明 GhFTL1 可能属于开花途径中的重要作用因子之一。（4） GhFTL1-GFP 融合蛋白在细胞膜和细胞核上均产生绿色荧光信号，表现出细胞膜和细胞核定位。 结论：陆地棉中克隆了一个与棉花成花素高度类似基因 GhFTL1。GhFTL1 在棉花中表现出组成型表 达的特征。GhFTL1 与 GFP 融合蛋白在细胞质膜和细胞核上均产生绿色荧光信号，表现出细胞膜和 细胞核定位。在拟南芥中异位表达 GhFTL1，转基因植株明显促进早花，表明 GhFTL1 可能属于开花 途径中的重要作用因子之一。 关键词：成花素；陆地棉；GhFTL1 基因；克隆；促进早花 I I II II Abs