棉铃虫单衣壳核型多角体病毒hasnpvorf101性质的初步分析-preliminary analysis of the properties of helicoverpa armigera monocapsid nuclear polyhedrosis virus hasnpvorf 101.docxVIP

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2018-07-27 发布于上海
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棉铃虫单衣壳核型多角体病毒hasnpvorf101性质的初步分析-preliminary analysis of the properties of helicoverpa armigera monocapsid nuclear polyhedrosis virus hasnpvorf 101

phaseininfectedinsectcells.WealsotrytofindoutsolubleexpressionconditionofGST-HA101,however,wefoundthatGST-HA101mainlyexpressedinformofinclusionbody,andverylittlesolubleproteinwasdetected.Inordertoknowthefunctionoforf101,weconstructedtherecombinantHaSNPVwithorf101deletioninE.coliBW25113.Inthispart,weclonedtheupstreamhomologousarmandhomologousdownstreamarmoforf101intothetwoendsofPhsp70-egfp-SV40-CmrseparatelyintheplamidofpKS-egfp-Cmr,andgetthelinearfragmentofha101UP-Phsp70-egfp-Cmr-ha101DObyrestrictionenzymedigestion,whichwasusedtohomologousrecombination.ThehelperplasmidpKD46encodesλphageRed-ETrecombinationenzymesystem,andtherecombinationwilloccurbetweenbacterialartificialchromosomeHaBacHz8andlinearfragmentha101UP-Phsp70-egfp-Cmr-ha101DOwiththehelpofpKD46.AfterPCRandrestrictionenzymedigestiondetection,wegottherecombinantHaBac△101.Forsystemanalysisthefunctionoforf101inthereplicationcycleofHaSNPV,weconstructedthreedifferentgenotypesoftherecombinantbacmid:orf101knockoutbacmid,HaBacKO;orf101repairbacmid,HaBacRep;wildtypecontrolbacmid,HaBacWt.AllbacmidsofabovewereaccompaniedwithegfpgeneandpolyhedringenederivedfromHaSNPV,andthiswasaccomplishedthroughBac-to-Bacsystem.Thesethreedifferentgenotypesofthevirusmadeitpossibletoanalyzetheimpactoforf101deletiononthegenomereplication，thetitreofbuddedvirus(BV)andoclusion-derivedvirus（ODV）assemblyetc.,thenwecoulddetermineitsexactfunction.Keywords:HaSNPV;orf101;prokaryoticexpression;polyclonalantibodypreparation;geneknockout学位论文独创性声明本人郑重声明：1、坚持以“求实、创新”的科学精神从事研究工作。2、本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。3、本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。4、本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。5、其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。作者签名：日期：学位论文使用授权声明本人完全了解南京师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版；有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅；有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索；有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。作者签名：日期：第一章前言杆状病毒是一类寄生于节肢动物的杆状的病原微生物[1]。其宿主主要是鳞翅目、膜翅目和双翅目的昆虫,还有一些杆状病毒可以感染甲壳纲的节肢生物。由于其高度的宿主特异性，杆状病毒作为有发展前景的无公害生物杀虫剂受到人们的广泛关注。随着分子生物学技术和方法的发展及应用，杆状病毒在分子水平的基础研究快速发展，其研究成果令人瞩目。杆状病