耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药突变选择窗的体内外分析-in vivo and in vitro analysis of mutation selection window for methicillin-resistant staphylococcus aureus.docx

安徽医 安徽医科大学博士学位论文 PAGE PAGE 2 结论 70 参 考文 献 71 六．附录 个人简历79 发表论文79 在读期间所获荣誉及参加学术交流情况80 致谢81 综述82 参考文献96 缩 略 词 表 缩略词 英文全称 中文全称 耐甲氧西林金黄色葡萄 MRSA Methicillin-resistant Staphylococcus aureus 球菌 MIC Minimal inhibitory concentration 最低抑菌浓度 CFU Colony forming unit 菌落形成单位 CLSI Clinical Laboratory Standard Institute 临床实验室标准研究所 Cmax Maximal serum concentration 最大血浆药物浓度 MPC Mutant prevention concentration 防耐药突变浓度 MSW Mutant selection window 耐药突变选择窗 SI Selectivity index 选择指数 VAN Vancomycin 万古霉素 LVX Levofloxacin 左氧氟沙星 RFP Rifampincin 利福平 FOM Fosfomycin 磷霉素 MPCpr provisional mutant prevention concentration 初测的 MPC 值 BHIA Brain Heart Infusion Agar 脑心浸液琼脂 VISA Vancomycin-Intermediate Staphylococcus aureus 万古霉素中介菌株 FICI fractional inhibitory concentration index 部分抑菌浓度指数 PK/PD pharmacokinetic/pharmacodynamic 药代/药效动力学 HPLC high-performance liquid chromatography 高效液相色谱法 24 小时药代动力学曲 AUC24 the area under the drug concentration time curve in a 24-h interval  线下面积 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药突变选择窗的体内外 研究 目的： 中文摘要 采用 3 种不同的方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)的标准菌株 ATCC43300 耐药突变株的最小抑菌浓 度(Minimal inhibitory concentration, MIC)，从而试图解释 MIC 漂移(MIC creep)和 万古霉素耐药突变选择窗(Mutant selection window, MSW)之间的关系。 体外研究万古霉素(VAN)分别与左氧氟沙星(LVX)、利福平(RFP)、磷霉素 (FOM)联用降低 ATCC43300 的防耐药突变浓度(Mutant prevention concentration, MPC)，筛选出防耐药突变能力最强的联合方案，更好地指导临床合理用药。 采用兔组织笼感染模型验证万古霉素对 MRSA 的 MSW 理论，计算出体内能 够抑制耐药突变体的选择及富集相关的基于 MIC 值及 MPC 值的药代动力学参 数，并将结果与体外模型进行比较。 材料与方法： 安徽省细菌耐药监控 中心保存 的 耐 甲 氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌 质 控 菌 株 ATCC43300 以及安徽医科大学实验动物中心提供的雌性新西兰白兔 28 只，体重 2.5-3kg。 采用琼脂二倍稀释法测定 ATCC43300 对 VAN 的 MIC 值。肉汤法富集浓度 为 3×1010CFU/ml 的 ATCC43300，取菌液 100 μl 用 L 棒均匀涂抹在每个含有倍比 稀释浓度的抗菌药物 MH 琼脂平皿上，每个药物浓度接种 4 个平皿，细菌总量为 1.2×l010CFU/ml，72h 后无菌落生长的最低药物浓度即为该药的初测防耐药突变浓 度(provisional mutant prevention concentration, MPCpr)。 为了精确测定 MIC99 及 MPC 值，将不同浓度抗菌药物平板上恢复生长的细 菌数与原菌液浓度的比值取对数，与抗菌药物的浓度作曲线即为细菌恢复生长曲 线。 从处于 MSW 不同部位(底部、中部、上部)的含药平板上挑取耐药突变菌 株，采用琼脂倍比稀释法(MHA)、脑心浸液琼脂倍比稀释法(BHIA)及 Etest 法测 定耐药突变菌株的 MIC 值。104CFU 的细菌点种于二倍稀释法配制的 MHA 及 B