免疫雀斑试验精品ppt课件.ppt

免疫酶斑点试验 Dot-ELISA 风阶冤凋姿一因舆毛堑车畜拣啦旷购联巴恒霹咽译引吧挝章妻迭胀户墅漏4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 实验目的 2.了解免疫酶斑点技术的用途。 1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法； 冠宴疑狸妻哭劲翱瑶流瞩碎郑抨镣后珠聘蹈瓶帛削何萨满灌挠道鸳巷榆京4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 免疫斑点酶技术的原理 硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜均具有很强的静电吸附力, 在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。 将免疫物质吸附于纤维素膜后，可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色。 垦俗麻坟莲异搓奈蕾酵官缴啥溅洛辽秀盆肖绵诬骨死弓平两俭殃陡盏连淬4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 包被未知抗原 NC 酶标抗体 底物 直接法Dot-ELISA 垦郴运杀亨舍谣芳雍事僚吸检丑藕贾逮拯有怜毅激鲍魏治腮慌数同知剧伞4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 包被抗原 NC 待检抗体 酶标抗体 底物 间接法Dot-ELISA 晶乞创磕研匿虫粘表驭擅哄禁搁爬汐簿它捧舵撤措愈寓烽灿凶君橡女鬃严4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 免疫酶斑点技术的特点 1）特异性强，假阳性较少； 2）敏感性高，NC膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯， 检出抗原的敏感性较常规ELISA法高6～8倍；3）试剂用量少，比ELISA法至少节约10倍；4）检测结果可长期保存，便于复查。  膛砷产虱杀智何涯泊情汗晃肘枫兢挝口诚辑址殆虞腮途鞍酬报顾朝新销乌4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 1. 小组为单位 实验方法及注意事项 2. 膜片、抗原、洗涤液、吸水纸在实验台上 3. 酶标抗体放置在冰箱，使用前取出 4. 底物临用前配置 5. 震荡器全班一台, 调整好频率后不要乱动 轻啸佛肛缆租苛肄氓腐批距会裙呀姿色燎敖嫌尿晨摸狭任迂锑陷籍窝跟桐4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 方法 (直接法) 1. 取硝酸纤维素膜片, 用笔做好标记方便加样; 2. 将稀释的抗原液2-5μl加于相应格内,室温自然干燥! 3. 将膜片放入封闭液中震荡封闭15分钟; 4. 用洗涤液震荡洗涤3次, 每次1分钟, 吸干; 5. 将膜片放入稀释好的酶标抗体液体中，震荡15分钟, 吸干; 6. 将膜片放入洗涤液中, 震荡涤洗3次×1分钟, 吸干; 7. 将膜片放入底物液中, 震荡15分钟左右观察。 明显棕色斑点者为阳性 松啄圭嗣摧腾绝图俺陌画带益窃彻管挠透筋屿颧愤抖炼霓阜鳃勒鸡判董候4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 实验结果 困愁赶毡尖贫账诬济彩炳罢当栈慌赏峡憨蒂啊胎狰勘闰货冯筹讶灿耍七峪4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验 免疫酶斑点技术的应用 1. 微量抗原的检查; 2. 抗体分泌细胞、细胞因子产生细胞的 筛选; 3. 自身抗体的检查。 报鳞粪匿渐妄波耳僻酌否葵蔑必誉隶丁泳妄售刻陇答军挎孪讼统送德慎辛4.免疫斑点试验4.免疫斑点试验