清热化瘀ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤tlr3及tram mrna表达的影响-effect of qingre huayu ⅱ recipe on tlr3 and tram mrna expression in rats with cerebral ischemia-reperfusion injury.docxVIP

清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤 TLR3 及 TRAM 表达的影响 中 文 摘 要 目 的 ： 观察清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤 Toll 样 受体 3(TLR3)、TRIF 相关受体衔接分子(TRAM)的影响，探讨清热化 瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元保护的作用机制。 方 法 ：将成年健康 SD 大鼠 192 只，按随机数字表随机分为两 大组。每组 96 只随机分为 4 个亚组：空白组(A 组)、假手术组(B 组)、 脑缺血再灌注组(C 组)、清热化瘀Ⅱ号方组(D 组)。采用二次线栓法 制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。各组分别作以下处理：A 组自由 饮食；正常饲养；B 组线栓只插入颈内动脉 9mm，术后正常饲养， 予生理盐水灌胃；C 组线栓插入颈内动脉 18-20mm，术后正常饲养， 予生理盐水灌胃；D 组术后清热化瘀Ⅱ号方灌胃，余处理同 C 组。参 考 Longa 的 5 分制法对大鼠进行神经功能缺损评分，B 组、C 组和 D 组大鼠分别在术后 I/R2h 后 3h、6h、12h、24h、48h 进行标本采集。 取材后，常规 HE 染色并在光镜下观察各组脑组织病理形态学改变， 应用荧光定量 PCR 法检测缺血侧海马区 TLR3、TRAM 的 mRNA 的 表达。 结 果 ：1. HE 染色结果：光镜下 A 组及 B 组均未见神经元损伤， C 组及 D 组有不同程度的神经元损伤，D 组在各时间点的受损神经元 明显少于 C 组；2.荧光定量 PCR 结果:(1)A 组与 B 组 TLR3 mRNA 呈 现低水平表达; C 组 TLR3 mRNA 表达较 B 组明显增加，差异有统计 学意义，(P＜0.05)；C 组和 D 组中，在缺血再灌注 3h，TLR3 mRNA 表达开始增加，至 24h 表达达峰，48h 后表达逐步下降。D 组 TLR3 mRNA 表达活性在同一时间点相比均低于 C 组，差异有统计学意义 （P0.05）；(2)A 组与 B 组 TRAM mRNA 呈现低水平表达；C 组 TRAM mRNA 表达较 B 组明显增加，差异有统计学意义，(P＜0.05)；C 组 和 D 组中，在缺血再灌注 3h，TRAM mRNA 表达开始增加，至 24h 表达达峰，48h 后表达逐步下降。D 组 TRAM mRNA 表达活性在同 一时间点相比均低于 C 组，差异有统计学意义，(P0.05)。 结论 ：清热化瘀Ⅱ号方可能通过下调 TLR3、TRAM 的 mRNA 表达，抑制 TLRs/NF-κB 信号通路的传导，减轻炎症级联反应，对大 鼠脑缺血再灌注损伤发挥神经元保护作用。 关 键 词 ： 清热化瘀Ⅱ号方, 脑缺血再灌注, TLR3, TRAM Effect of Qingre Huayu PrescriptionⅡon the expression of Toll like receptor-3 and TRIF-related adaptor molecule in rats after cerebral ischemia reperfusion injury A B S T R A C T O b j e c t i v e s: To investigate the effect of Qingre Huayu Prescript- ionⅡ(QRHYⅡ) on the expression of toll like receptor-3(TLR3) and TRIF-related adaptor molecule(TRAM) after focal cerebral ischemia/rep- erfusion(I/R) in rats and to discuss its mechanism of nerve protection. Methods:One hundred and ninety-two healthy SD rats were randomly divided into two big groups random number table. Ninety-six rats were randomly divided into four subgroups in each group: the normal control group(group A), sham operation group(group B), ischemia-reperfusion group(group C)and Qingre Huayu PrescriptionⅡ group(group D). Group B、C and D were further