清热化瘀颗粒预处理对脑缺血大鼠chop、gadd34蛋白表达的影响-effect of qingre huayu granule pretreatment on expression of chop and ga dd34 protein in rats with cerebral ischemia.docxVIP

PAGE PAGE 10 中 文 摘 要 目 的： 观察清热化瘀颗粒对局灶性脑缺血大鼠脑内 CHOP、 Gadd34 蛋白的影响，探讨清热化瘀颗粒预处理对局灶性脑缺血大鼠的神 经元保护作用。 方 法 ：将80只大鼠随机分为四组，即假手术组（sham-operation， SO）；MCAO组：假手术+脑缺血组（SO+MCAO）；BIP组：预缺血+脑缺 血组 （ BIP+MCAO ）。 QRHY 组 ： 预 缺 血 + 清 热 化 瘀 颗 粒 + 脑 缺 血 组 （BIP+QRHY+MCAO）；每组20只。每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d 四个时间点平均分为4个亚组（n=5）。采用大鼠大脑中动脉二次线栓法制 备大鼠脑缺血预处理模型，分别作如下处理：假手术组（SO组）：以假手 术代替预缺血及缺血再灌注，线栓只插入颈内动脉9mm，然后正常饲养， 自由饮水；MCAO组：以假手术代替预缺血，其余步骤同脑缺血预处理 组，动物造模后正常饲养，自由饮水，灌胃等体积的生理盐水；BIP组： MCAO 10min后抽出栓线，完成预缺血；3d后再次行MCAO 2h，灌胃等 量生理盐水，再灌注后12h、1d、2d、3d处死；QRHY组：缺血预处理10min 后，在大鼠麻醉清醒后1h灌胃清热化瘀颗粒溶液，按每次1.4m1/100g给药， 其浓度及等效剂量按体表面积折算，连续3d，每天上、下午各一次。3d 后给予2hMCAO，再灌注后12h、1d、2d、3d处死；造模后取材，常规HE 染色并在光学显微镜下观察各组脑组织病理形态学改变，应用免疫组织 化学方法检测CHOP、Gadd34蛋白在大鼠梗死灶表达的变化。 结 果： 各组均可见 CHOP、Gadd34 蛋白表达，主要在梗死区 周围皮层，阳性表达为细胞胞浆呈棕黄色，多数阳性细胞发生形态学改 变，胞核皱缩，呈梭形或条索状。图像分析结果显示：假手术组大鼠大 脑顶叶皮层有少量 CHOP、Gadd34 蛋白阳性细胞表达。MCAO 组大鼠脑 缺血再灌注后 CHOP、Gadd34 蛋白表达平均灰度值明显下降，表明其蛋 白阳性数明显增多(P0.01)。 对于 CHOP 蛋白，再灌注 1d 其平均灰度值降至最低，表明其阳性细 胞表达达高峰(P0.01)，至再灌注 2d 其蛋白表达平均灰度值仍高。BIP 组能明显升高大鼠缺血再灌注损伤后 CHOP 蛋白表达平均灰度值水平， 即能降低阳性细胞表达数，与 MCAO 组比较，BIP 组大鼠 12h 至 1d CHOP 蛋白表达平均灰度值明显上升(P0.01)。清热化瘀颗粒预处理组表达较单 纯缺血再灌注组低(P0.01)，与 BIP 组比较，大鼠 1d CHOP 蛋白表达平 均灰度值明显上升(P0.05)，且与脑组织病理形态学改变相一致。说明清 热化瘀颗粒预处理能够抑制梗死后 CHOP 表达。 对于 Gadd34 蛋白，再灌注 12h 其平均灰度值降至最低，表明其阳性 细胞表达达高峰(P0.01)，至再灌注 1d 其蛋白表达平均灰度值开始升高。 BIP 组及 QRHY 组与 MCAO 组比较，1d 至 2d Gadd34 蛋白表达平均灰度 值明显下降(P0.01)，且两组再灌注 1d 其平均灰度值降至最低，表明其 阳性细胞表达达高峰(P0.01)，1d 至 2d 均能持续性表达(P0.01)，至 3d 时蛋白表达平均灰度值开始升高(P0.01)。QRHY 组与 BIP 组比较，12h 至 2d 的灰度值表达均低于 BIP（P0.01），与脑组织病理形态学改变相一 致，说明清热化瘀颗粒预处理能够上调梗死后 Gadd34 表达。 结 论： 清热化瘀颗粒预处理可能通过抑制前凋亡因子 CHOP 蛋白的合成，上调前存活因子 Gadd34 蛋白的表达，从而发挥其神经保护 作用；CHOP、Gadd34 蛋白是脑缺血耐受机制之一。 关键词：清热化瘀颗粒；预处理；内质网应激；CHOP；Gadd34 The effect of Qingrehuayu granule pretreatment on cerebral ischemia of CHOP and Cadd34 Proteins Expression Abstract Objective: To observe the effect of Qingrehuayu (QRHY) granules on focal cerebral ischemia reperfusion (I/R) of Chop and Gadd34 proteins in rats’ brain, and to discuss the neuron protective function of QRHY granules as pre-treatme