沙格列汀通过抑制sdf-1α降解促进2型糖尿病大鼠胰岛β细胞增殖作用的研究-study on saxagliptin promoting islet β cell proliferation in type 2 diabetes rats by inhibiting sdf - 1α degradation.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一种多因素引起的慢性糖脂代谢紊乱性疾 病，β 细胞功能不全是糖尿病发病的根本原因。正常情况下，胰岛 β 细胞量是 由胰腺前体细胞的数量决定的，并在生长过程中维持增殖、坏死、凋亡的总体 平衡。就当前资料来看，促进 β 细胞凋亡的相关机制已经被广泛研究，主要包 括糖毒性、脂毒性、胰多肽沉积及氧化应激等，但是即使进行良好的血糖血脂 控制，β 细胞的进行性损伤仍不可避免，因此发现潜在的促进 β 细胞增殖的因 素至关重要。基质细胞生成因子（stromal cell derived factor-1 ,SDF-1α）作为一 种小肽类趋化因子，研究证实在胰岛 β 细胞表面表达有 SDF-1α 的受体，并且 当胰岛 β 细胞受到损伤后 SDF-1α 表达上调，激活下游具有促生长作用的 WNT 信号通路而发挥促进受损胰岛 β 细胞再生的作用。二肽基肽酶 DPP-4 作为一种 体内固有的丝氨酸蛋白酶，近年来由于发现了其在糖尿病发病过程以及治疗过 程中的良好作用而受到广泛关注。2 型糖尿病（T2DM）患者体内 DPP-4 活性 增加，可降解糖尿病患者体内升高的 SDF-1ɑ 而使其达不到保护胰岛功能的作 用。因此，本研究以高脂喂养加 STZ 尾静脉注射建立 2 型糖尿病大鼠模型为基 础，给与沙格列汀干预 12 周，拟探讨以 DPP-4 抑制剂沙格列汀抑制糖尿病大 鼠体内升高的 DPP-4 酶活性，减少具有促增殖作用的 SDF-1α 的降解，观察其 对胰岛功能及胰岛 β 细胞增殖的影响，并初步探讨其保护胰岛功能、促进 β 细 胞再生的相关机制。 方法 雄性 8 周龄 SD 大鼠，随机分为 N 组（n=10），D 组（n=10）和 S 组（n=10）。 其中，N 组为正常对照组，普通饲料喂养 8 周后尾静脉注射柠檬酸缓冲液；D 组 为 2 型糖尿病模型组，S 组为沙格列汀干预组，高脂饲料喂养 8 周后，按 30mg/kg 体重剂量尾静脉注射 2% STZ 溶液。成模后，在第 9 周末起，S 组给予沙格列 汀 1mg/kg/d 剂量灌胃，N 组及 D 组给予相应体积无菌注射用水灌胃，每周测量 一次体重，每隔一周测一次血糖。干预 12 周后，进行高糖钳夹实验取血测定各 时间点胰岛素水平，并处死动物。取胰腺组织称重，10%福尔马林常规固定部 分组织，HE 染色观察胰腺组织结构形态，抗大鼠胰岛素抗体、胰高血糖素抗体、 SDF-1ɑ 抗体免疫荧光双染观察胰腺组织中胰岛素阳性细胞、胰高血糖素阳性细 I 胞及 DPP-4、SDF-1ɑ 的表达，PCNA 免疫染色观察胰岛 β 细胞增殖情况；另一 部分胰腺组织液氮冻存，western blot 方法检测信号通路相关蛋白 Akt、p-Akt、 βcatenin 及 free-βcatenin 的表达，Real Time-PCR 的方法检测增殖相关基因 c-myc 及 cyclinD1 的 mRNA 表达。 结果 ⑴ 与 N 组相比，D 组及 S 组大鼠血糖较高而体重较低，但是 D 组及 S 组 大鼠之间血糖及体重水平无明显差异。 ⑵ 干预第 12 周末，D 组及 S 组大鼠血清 ALT、AST、BUN、TC、TG 及 LDL 水平均明显升高，与 D 组相比，S 组大鼠血清 ALT、BUN 及 TG 的水平有 明显改善。 ⑶ 干预第 12 周末，D 组大鼠胰岛分泌功能明显受损，第一时相缺失，第 二时相分泌减少，沙格列汀干预后第一时相和第二时相的分泌功能均有明显改 善。 ⑷ 干预第 12 周末，HE 结果显示 D 组大鼠胰岛结果紊乱，排列不规则， 可见胰岛内细胞空泡变性，而沙格列汀组的胰岛相对完整，胰岛边界较清晰， 细