妊娠期缺氧对子代大鼠胰岛素抵抗的影响及其机制分析-effect of hypoxia during pregnancy on insulin resistance in offspring rats and its mechanism analysis.docxVIP

妊娠期缺氧对子代大鼠胰岛素抵抗的影响及其机制研究中文摘要目的：本项目旨在研究妊娠期缺氧对出生后子代大鼠胰岛素抵抗的影响，并初步探索脂肪因子分泌型卷曲相关蛋白5（secretedfrizzled-relatedprotein5，Sfrp5）与子代胰岛素抵抗可能机制。方法：Sprague-Dawley(SD)孕鼠16只，于妊娠第7天随机均分为常氧对照组[control]和妊娠期缺氧组[maternalhypoxia,MH]以建立妊娠期SD孕鼠缺氧模型。孕鼠分娩后，选取子代雄性大鼠作为研究对象，予母乳喂养至3周龄断奶给予高脂饮食[high-fatdiet,HFD]，将子代雄性大鼠分为4个实验组：常氧对照+正常饮食组[control]；妊娠期缺氧+正常饮食组[MH]；常氧对照+高脂饮食组[HFD]；妊娠期缺氧+高脂饮食组[MH+HFD]，各组继续喂养12周。子代大鼠于3周龄及15周龄分批处死，留取标本进行实验指标检测。留取血液指标进行总胆固醇（totalcholesterol,TC），甘油三酯（triglyceride,TG），游离脂肪酸（freefattyacid,FFA），低密度脂蛋白胆固醇（low-densitylipoproteincholesterin,LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（high-densitylipoproteincholesterin,HDL-C），空腹血糖（fastingbloodglucose,FBG）及空腹血清胰岛素（fastinginsulin,FINS）测定，并以稳态模型评估其胰岛素抵抗指数（homeostasismodelassessmentinsulinresistanceindex，HOMA-IR）；观察15周龄子代雄性大鼠肝脏组织病理形态学表现；免疫组织化学检测脂肪组织中巨噬细胞标志物F4/80蛋白表达情况；采用蛋白印迹法（WesternBlot,WB）及实时荧光定量聚合酶链反应（quantitativereal-timepolymerasechainreaction,QRT-PCR）方法检测3周龄及15周龄子代雄性SD大鼠脂肪组织中脂肪因子Sfrp5及Wnt5a（Wingless-typeMMTVintegrationsitefamilymembers5a,Wnt5a）mRNA及蛋白表达情况；再采用WB方法对Wnt5a/JNK信号传导通路中主要效应分子c-Jun氨基末端激酶1（c-JunN-terminalkinase1，JNK-1）、c-Jun及胰岛素受体底物1(insulinreceptorsubstrate1,IRS-1)蛋白表达情况进行检测。结果：妊娠期缺氧可引起子代雄性SD大鼠血清TC,TG,FFA,LDL-C,FINS及HOMA-IR增高，同时其HDL-C降低，差异具有统计学意义(均P＜0.05)。病理标本提示妊娠期缺氧组子代大鼠中脂肪含量增加，高脂饮食组肝脏组织中脂肪含量增加，差异有统计学意义(均P＜0.05)。免疫组化结果提示妊娠期缺氧组大鼠脂肪组织巨噬细胞标志物F4/80蛋白表达上调(P＜0.05)。WB及QRT-PCR检测结果显示3周龄及15周龄妊娠期缺氧组子代雄性SD大鼠脂肪组织Sfrp5的mRNA及蛋白表达水平显著降低，而Wnt5a的mRNA及蛋白表达呈增加现象，Wnt5a与Sfrp5表达比例失衡（均P＜0.05）。妊娠期缺氧组子代雄性SD大鼠脂肪组织中P-JNK-1(Thr183/Tyr185),P-c-Jun(Ser63)和P-IRS-1(Ser307)蛋白磷酸化表达显著上调（均P＜0.05）。高脂饮食所致高脂血症可协同促进上述各个观察指标的变化(均P＜0.05)。结论：妊娠期缺氧子代雄性SD大鼠呈现胰岛素抵抗现象，妊娠期缺氧子代大鼠存在胎儿程序控制。妊娠期缺氧对子代大鼠脂肪组织Sfrp5及其配体Wnt5a表达存在影响，进而通过Wnt5a/JNK信号通路影响胰岛素信号转导通路，可能是其致子代发生胰岛素抵抗的分子机制之一。妊娠期缺氧与高脂血症具有协同促进子代雄性SD大鼠胰岛素抵抗作用。关键词：妊娠期缺氧胰岛素抵抗胎儿程序控制脂肪因子分泌型卷曲相关蛋白5TheEffectsofMaternalHypoxiaDuringPregnancyonInsulinResistanceinRatsOffspringandItsMechanismAbstractObjective:Toexploretheeffectsofmaternalhypoxia(MH)duringpregnancyoninsulinresistanceinratoffspringandadipocytokinesecretedfrizzled-relatedprotein5(Sfrp5)itsposs