三氧化二砷对膀胱癌t24细胞apaf-1及apc基因表达的影响-effect of arsenic trioxide on apaf - 1 and apc gene expression in bladder cancer t24 cells.docxVIP

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三氧化二砷对膀胱癌t24细胞apaf-1及apc基因表达的影响-effect of arsenic trioxide on apaf - 1 and apc gene expression in bladder cancer t24 cells

三氧化二砷对膀胱癌T24细胞Apaf-1及APC基因表达的影响中文摘要目的:研究三氧化二砷(As2O3)对膀胱癌T24细胞中凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptosisproteaseactivatingfactor-1,Apaf-1)和腺瘤性结肠息肉病相关基因(Adenomatouspolyposiscoli,APC)表达的影响,并初步探讨三氧化二砷作为抗膀胱癌新药的可行性及可能作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测膀胱癌T24细胞存活率,观察As2O3对细胞存活率的影响;用Hoechst33342荧光染色,观察不同处理条件下凋亡细胞的核形态变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测膀胱癌T24细胞凋亡指数;Transwell法检测As2O3对膀胱癌T24细胞侵袭力的影响;半定量RT-PCR法检测抑癌基因Apaf-1mRNA、APCmRNA的表达;Western-blotting法检测抑癌基因Apaf-1蛋白、APC蛋白的表达变化。结果:1.与空白对照组(As2O30μmol/L)比较,加入不同浓度的As2O3(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L),作用于T24细胞24、48和72h后,每时间组内部细胞存活率明显降低,细胞活性呈剂量依赖性下降。当As2O3浓度为4μmol/L和8μmol/L时,分别作用T24细胞24、48和72h后,细胞活性呈时间依赖性下降(P0.05,P0.01)。2.Hoechst33342荧光染色观察,正常对照组细胞呈均匀荧光染色,细胞核形态规则圆形或者椭圆形,As2O32μmol/L处理细胞24h后,可见部分细胞出现致密浓染、核碎裂;与对照组相比,TUNEL检测As2O3可以明显促进细胞凋亡,且As2O3对膀胱癌T24细胞的诱导凋亡作用在1μmol/l~8μmol/l浓度范围内具有剂量和时间依赖性(P0.05,P0.01)。3.Transwell检测As2O3在0.1μmol/L~0.4μmol/L区间内可以明显降低膀胱癌T24细胞的侵袭力,且侵袭力呈剂量依赖性降低(P0.05,P0.01)。4.半定量RT-PCR结果,与对照组比较As2O3在2μmol/L~8μmol/L作用72h后使膀胱癌T24细胞Apaf-1mRNA、APCmRNA表达升高,且两者分别呈现剂量依赖性升高(P0.05,P0.01)。5.Western-blotting结果,与对照组比较As2O3在2μmol/L~8μmol/L作用72h后使膀胱癌T24细胞Apaf-1蛋白和APC蛋白表达升高,且两者分别呈现剂量依赖性升高(P0.05,P0.01)。结论:1.As2O3处于1μmol/L~8μmol/L范围内时,对T24细胞增殖抑制呈剂量依赖性;同时As2O3浓度为4μmol/L和8μmol/L时,其对T24细胞增殖抑制还存在时间依赖性。2.As2O3可以促进膀胱癌T24细胞凋亡且其在1μmol/l~8μmol/l浓度范围内凋亡率具有有剂量和时间依赖性升高。3.As2O3可以降低膀胱癌T24细胞的侵袭力,且As2O3在0.1μmol/L~0.4μmol/L范围内时,侵袭力呈剂量依赖性降低。4.As2O3促进膀胱癌T24细胞凋亡的作用机制可能与上调抑癌基Apaf-1mRNA、APCmRNA的转录以及两者的蛋白的表达量来实现的。关键词:膀胱癌;膀胱癌T24细胞;As2O3;APC;Apaf-1TheImpactofArsenicTrioxideonBladderCancerT24cellsApaf-1andAPCGeneExpressionObjective:AbstractToobservedtheimpactofarsenictrioxide(As2O3)ontheapoptoticproteaseactivatingfactor-1geneandadenomatouspolyposiscoli(APC)geneexpressioninbladdercancerT24cellsandinvestigatearsenictrioxideasagainstbladdercancerdrugfeasibilityandpossiblemechanismofaction.Methods:TheT24cellsviabilitywasmeasuredbyMTT.ThemorphologyofT24cellsnucleiwereobservedbyHochest33342staining.TheT24cellsapoptosisindexwasobservedbyTdT-mediateddUTPnickendlabeling(TUNEL).TheInvasionforceofT24cellsweredetec

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