乳腺癌中tip30 p53及bcl-2蛋白的表达及意义-expression and significance of tip 30 p53 and bcl - 2 protein in breast cancer.docxVIP

达与肿瘤病理分级有关（P0.05)，而与乳腺癌有无淋巴结转移、临床分期及发病年龄无关（P0.05）。结论：Tip30、p53及Bcl-2参与了乳腺癌的发生、发展和转移,TIP30的表达在乳腺癌的发展和预后中扮演着重要的角色；在乳腺癌中，TIP30的表达与p53及Bcl-2的表达具有相关性。关键词：TIP30；p53;Bcl-2;乳腺肿瘤；免疫组化；前言乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在全球均呈上升趋势，每年以0.2%一8%的幅度上升，并有年轻化趋势。在欧美等国家，乳腺癌已成为女性的主要死因之一。在我国许多城市，乳腺癌己位居女性恶性肿瘤的首位，而其转移和复发是患者常见的死亡原因，因此对乳腺癌患者的预后进行判断是乳腺癌综合治疗不可少的一部分。病理分级、临床分期、淋巴结转移情况等因素是乳腺癌预后判断较为常用的指标，目前已有多种肿瘤癌基因和抑癌基因用于判断肿瘤转移与预后。TIP30蛋白是由TIP30基因编码的一种30kD的Tat(Transactivatoroftranscription)结合蛋白(Tat—InteractiveProtain)，又称HTATIP2(HIV—lTatinteractiveprotein2)，是XiaoH[1]等在研究人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus，HIV)的体外转录时发现的，其作为HIV转录的辅助因子可以和Tat相互结合特异性地提高HIV增殖。序列分析发现TIP30与肿瘤转移抑制基因CC3为同一基因。CC3是1997年ShtivelmanE[2]利用RNA差异显示技术发现的一种与肿瘤转移抑制相关的基因。细胞周期分析结果显示[3]，TIP30对G0～G1期细胞有阻断作用,从而使S期细胞比例下降,达到抑制肿瘤细胞增殖。TIP30基因具有抑制肿瘤转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成等作用，在评价肿瘤的预后及基因的靶向治疗中具有重要的意义。P53基因定位于染色体17P13.1，有野生型和突变型两种形式，野生型p53基因是重要的抑癌基因,突变型p53基因是促癌基因，突变型p53基因能和野生型亚单位形成寡聚复合物而阻止野生型亚单位起作用，从而阻止野生型p53基因抑制肿瘤形成的功能，引起细胞转化、癌变[4]。据研究p53基因在人类乳腺癌的突变率为15%-50%[5]，有的作者报道为59.3%[6]。野生型p53蛋白半衰期短，用免疫组化方法难以检测出，而突变型p53蛋白半衰期长，因此，免疫组化检测到的是突变型p53蛋白。Bcl-2基因定位于18q21.3染色体上，长约230kb，有3个外显子和2个启动子，在外显子2和3之间，有一个大约225kb的内含子。Bcl-2基因是Tsujimoto等在滤泡状B细胞淋巴瘤中首先鉴定的第一个抑制细胞凋亡的基因,具有抑制细胞丢失、阻止细胞凋亡的功能，因而被称为“存活基因”。Bcl-2的过度表达与多种上皮性肿瘤的发生发展密切相关[7]。已经明确Bcl-2基因蛋白的表达、p53基因突变是乳腺癌预后的危险因素，但它们在乳腺癌发生、发展的全过程中的作用存在不同的结论，与临床分期、淋巴结转移、病理分级以及患者年龄等相关性结果报道不一。本实验通过免疫组化法对40例浸润性导管癌中TIP30、p53及Bcl-2蛋白的测定，并对它们在乳腺癌组织中表达作相关研究，目的在于对TIP30、p53及Bcl-2蛋白表达与乳腺癌患者临床分期、病理分级、淋巴结转移及发病年龄等因素进行临床相关性分析。材料与方法1．材料随机收集贵阳医学院附属医院病理科1998年1月-12月收治的乳腺癌患者40例，手术后经病理证实为乳腺浸润性导管癌，患者均为女性，年龄25～70岁，平均45.5岁。其中伴有腋窝淋巴结转移者20例。临床分期I期15例，II期17例，III期8例。病理组织学分级I级13例，II级17例，III级10例。对照组选取同期乳腺小叶增生症20例，所有标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片厚4μm。全部标本均经病理切片复查确诊。2．方法2．1免疫组织化学染色方法按试剂盒说明书进行，采用Envision法。具体步骤如下:2．1．1连续石蜡切片4μm厚，捞片后58-60℃烘烤1-1.5小时，经二甲苯脱蜡，酒精梯度水化后，用PBS(PH7.2-7.4)冲洗三次，每次3分钟。2．1.23%过氧化氢溶液封闭内源性过氧化物酶，室温孵育10分钟。2．1.33%过氧化氢溶液处理后的组织切片蒸馏水漂洗，PBS液冲洗三次，每次3分钟。2．1．4高压锅热修复：将组织切片放入煮沸的EDTAEDTA(pH9.0)中，加热，至高压锅喷气后计时2分钟，至流水下冲洗，冷却至室温后，开盖取出切片蒸馏水漂洗，PBS液冲洗三次，每次3分钟，甩干；2．1．5滴加一抗（PBS稀释抗体，TIP30的