三种支架用于牙周组织工程的体外实验分析-in vitro experimental analysis of three kinds of scaffolds for periodontal tissue engineering.docxVIP

缩略词表缩略词英文全称中文名称BMSCSbonemarrowmesenehymalstem/bonemarrowstromalcells骨髓间充质干细胞/骨髓基质细胞CSchitosan壳聚糖SFsilkfibroin丝素蛋白TCPtricalciumphosphate磷酸三钙MTTthiazolylbluetetrazoliumbromide四甲基偶氮唑盐ALPalkalinephosphatase碱性磷酸酶SEMseanningelectronmieroscope扫描电子显微镜三种支架用于牙周组织工程的体外实验研究中文摘要目的对单纯壳聚糖、壳聚糖-丝素蛋白复合体、壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体这三种支架材料进行相关体外实验研究，探索生物材料用于牙周组织工程的优化方法，为牙周组织工程支架材料的选择和进一步的动物体内实验提供实验依据。方法采用二次冷冻干燥技术制备单纯壳聚糖、壳聚糖-丝素蛋白复合体、壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体三种支架，研究三种支架的微观结构、力学性能、体外降解性；同时将大鼠骨髓基质细胞分离培养、诱导后，与三种支架材料体外共培养，从支架的细胞毒性、直接接触实验、细胞粘附率、细胞增殖活性等方面来评价三种支架材料的细胞相容性。结果1、三种支架的微观结构、力学性能、体外降解性的检测结果相比单纯壳聚糖和壳聚糖-丝素蛋白复合体支架而言，壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体支架大体形貌稳定，冰冻切片光镜下测量的孔径值、孔隙率最大，分别为0.30±0.10mm、81.68±8.71%；压缩强度最大，为1.44±0.96MPa；体外降解率第1、2周时三种支架相近，到第3、4周时，单纯壳聚糖和壳聚糖-丝素蛋白复合体支架降解速率加快，分别为67.05±1.70%、71.65±2.48%，而壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体支架的降解速率减慢，为58.06±1.99%，但与组织再生速度相匹配。2、支架的细胞毒性检测结果MTT法检测到的壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体支架各时间点各浓度浸提液对L-929（小鼠皮肤成纤维细胞）的相对增殖率均在75%以上,毒性分级为0级或1级，无细胞毒性，生物相容性好，可作为体内植入材料。3、三种支架的细胞相容性检测结果扫描电镜下，细胞在三种支架内生长状态均良好，形态饱满，伸出多个突起粘附于材料表面,在支架的孔隙内分散或集中分布。相比单纯壳聚糖和壳聚糖-丝素蛋白复合体支架而言，壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体支架细胞粘附率和细胞增殖活性更高，能促进骨髓基质细胞的粘附与增殖。结论利用不同性质的材料构建复合支架材料是生物材料用于牙周组织工程支架的一种优化方法；壳聚糖-丝素蛋白-磷酸三钙复合体支架在微观结构、力学性能、体外降解性、细胞相容性方面均显示出明显优势，是一种具有潜在价值的牙周组织工程支架。关键词牙周组织工程；支架；体外实验；壳聚糖；丝素蛋白；磷酸三钙InVitroExperimentalStudyofThreeTypesofScaffoldsusedinPeriodontalTissueEngineeringAbstractObjectivesTostudythemicrostructure,mechanicalproperties,invitrodegradationandcellcompatibilityofthreetypesofscaffoldmaterials:purechitosan,chitosan-silkfibroincomplexandchitosan-silkfibroin-tricalciumphosphatecomplexaswellastoexploretheoptimizationmethodsofbiologicalmaterialsasperiodontaltissueengineeringscaffolds.Thenprovidedthefurtherexperimentalevidencetoperiodontaltissueengineering’sscaffoldmaterialsandfurtheranimaltesting.MethodsSecondaryfreeze-dryingmethodtopreparethreekindsofstentsmadefrompurechitosan,chitosan-silkfibroincomplexandchitosan-silkfibroin-tricalciumphosphatecomplex,studyofthemicrostructure,mechanicalproperties,invitrodegradabilityofthethreestents;meanwhile,isolate,cultureand