医药卫生色谱质谱联机技术在药物分析方面的应用ppt课件.pptVIP

SRM Chromatograms of bambuterol in plasma 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 Time (min) 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 NL: 5.0E2 NL: 1.0E3 SRM m/z 368 ? 293 SRM m/z 377 ? 284 Plasma sample 4 h after administration Blank plasma (班布特罗) (内标) 选择性检测尿中普罗帕酮 I 相代谢产物 人服药后尿样 TIC m/z 300 m/z 316 m/z 340 m/z 342 m/z 358 m/z 374 m/z 388 Full scan MS3 of peak II m/z 358 单羟基代谢产物的结构鉴定 Full scan MS3 of peak I I II 峰 I/II 单羟基代谢产物的结构 4’ 5 峰 I : 4’-羟基普罗帕酮 峰 II: 5-羟基普罗帕酮 普罗帕酮氧化代谢产物质谱断裂特点 new new new new new 结合型代谢产物的分析方法 间接法 直接法 GC/MS （衍生化） LC/MS 酶水解法或 化学水解法 + RH 分离鉴定尿中普罗帕酮的结合型代谢产物 色谱条件 色谱柱：Nucleosil C18柱 流动相：甲醇：乙腈：水：冰醋酸（40: 60: 100：1.3，v/v） 流速：0.5 ml/min 柱温：22℃ 质谱条件 离子源：电喷雾离子化源（ESI）；离子源喷射电压：4.5 kV； 毛细管温度：200℃；毛细管电压：25 V；管透镜补偿电压：46 V； 壳气（N2）流速：50 a.u. ；辅助气（N2）流速：10 a.u. ； 检测方式：正离子检测。 峰II/III 峰 I ?176 ?176 I II III 峰 II/III 峰 I 单羟基普罗帕酮 葡萄糖苷酸 SIM 534?1.5 ?176 峰 I 峰 II/III 峰 I 峰 II/III * * 分离鉴定二羟基代谢物的葡萄糖苷酸型结合物 I III IV V m/z 550 分离鉴定羟基-甲氧基代谢物的葡萄糖苷酸型结合物 I II m/z 564 分离鉴定普罗帕酮硫酸型结合物 讨论 — 普罗帕酮结合型代谢物的色谱和质谱特点 葡萄糖苷酸型结合物 (+)-ESI/MS2 生成特征碎片离子[MH-176]+ 硫酸型结合物 (+)-ESI/MS2 生成特征碎片离子[MH-80]+ 以侧链醇羟基与葡萄糖醛酸形成的结合物，经色谱分离，得到一对非对映 异构体色谱峰 以酚羟基与葡萄糖醛酸形成的结合物，经色谱分离，得到单一色谱峰； 药物代谢研究的特点 电喷雾接口：适用于多种结构类型， 质量范围宽 ( m/z 50-2000 ) 多级质谱：获得丰富的结构信息 ESI和APCI电离方式：生成准分子离子峰，提供分子量信息 高灵敏和选择性：适用于痕量样品和混合物 多级质谱 在药物动力学研究中的应用 ? ? ? 福辛普利临床药动学研究 福辛普利 血管紧张素转化酶抑制剂 福辛普利拉 MW 435 血浆中福辛普利拉的LC/MSn测定方法 色谱条件 色谱柱: Zorbax C8不锈钢柱（150?4.6 mm ID，5?m，Hewlett Packard） 流动相: 甲醇?乙腈?0.015M氨水（30: 30: 40，v/v） 流速：0.2 mL?min-1 质谱条件 ESI 源；负离子检测；源电压: 4.25 kV；鞘气流速: 60 a.u；辅助气流速: 5 a.u.；毛细管温度: 180℃；毛细管电压: -15.5 V；管透镜补偿电压: -27.0 V；相对碰撞能: 22%。 SRM方式选择性检测待测物的产物离子（m/z 434 → m/z 237） Full scan MS2方式检测内标物的产物离子（m/z 375→ m/z 114, 301, 329） 福辛普利拉及内标物二级全扫描质谱图 233 234 235 236 237 238 239 240 241 m/z 0 20 40 60 80 100 Relative Abundance 237.3 238.4