四种常见海藻提取液免疫调节及对肿瘤细胞体外增殖的分析-immune regulation of four common seaweed extracts and analysis of proliferation of tumor cells in vitro.docxVIP

四种常见海藻提取物兔疲调节及对肿癌细胞体外增殖的研究摘要目的:许多海藻不仅营养丰富，而且还含有一些生物活性物质，如褐藻糖胶，红藻氨酸，褐藻氨酸及海藻多糖衍生物等。有研究表明，一些海藻及其提取物如藻类多糖、多肤和藻蓝蛋白等具有明显的免疫调节及抗肿瘤活性，但目前国内外关于海藻抗肿瘤机制的研究较少，本研究旨在初步探讨几种常见海藻水溶性提取液的体外免疫调节活性及抗肿瘤机制，以期为进一步用于肿瘤预防及肿瘤临床营养治疗提供科学依据。方法:采用小鼠脾淋巴细胞增殖实验研究了海带等四种海藻水溶性提取液的免疫调节活性，无菌条件下取小鼠脾脏，制成小鼠脾细胞悬液，调整细胞浓度为1X106;时，接种于96孔培养板，实验孔分别加入不同浓度的四种海藻提取液，阳性对照剂为ConA(T细胞特异性有丝分裂原)和LPS(B细胞特异性有丝分裂原)，阴性对照剂为磷酸盐缓冲液。于50/0C02、370C培养52h，加入氟一脱氧胸腺暗睫核营c日一TdR)，再继续培养20h后，收集细胞，测定掺入细胞DNA内的放射性强度，并计算淋巴细胞转化指数。选择四种海藻提取液对小鼠脾淋巴细胞增殖促进作用的最佳浓度，采用生物学方法测定四种海藻提取液刺激小鼠单核细胞产生肿瘤坏死因子的作用，TNF-a含量采用对TNF-a敏感的纤维母细胞株(L929)测定:采用体外抑瘤实验研究了四种海藻提取液的不同浓度样品对四种肿瘤细胞(人红白血病细胞株K562、人卵巢癌细胞株SK-OV3、人食管癌细胞株TE-13、小鼠腹水瘤细胞株S180)增殖的抑制作用，收集处于对数生长期的肿瘤细胞，调整细胞浓度为1X105/ml，接种于96孔细胞培养板，实验孔分别加入终浓度为0.625皿g/川、1.250mg/ml、2.500mg/削和5.000mg/ml(裙带菜为1.250mgl川、2.500mg/川、5.000mg/削和10.?OOmg/ml)的囚种海藻提取液，阳性对照剂为终浓度20μg/ml的顺钮，阴性对照剂为磷酸盐缓冲液，于5%C02370C条件下培养72h，于培养结束前4小时，各培养孔加入MTT，用酶联免疫检测仪于620nm波长测定各孔吸光度值，以空白对照孔调零，计算抑制率。采用凝胶层析法提取并分离了裙带菜的主要成分。实验结果用均数士标准差来表示，组间比较用单因素方差分析的Dunnett检验，数据处理用SPSSI0.。统计软件分析。结果z1.四种海藻的水溶性提取液对小鼠脾细胞的增殖均有不同程度的促进作用，但不同海藻的促进作用存在着差别。海带各浓度组对小鼠脾淋巴细胞的增殖均表现有明显的促进作用，与阴性对照组比较均有显著的意义CPO.01);裙带菜各浓度组都可显著剌激淋巴细胞的转化(PO.Ol)，且随着剂量的增加，剌激作用有逐渐增强的趋势:条斑紫菜除O.625mg/ml浓度组外，其它三个浓度组均能显著促进淋巴细胞转化(O.313mg/ml、1.250mg/ml浓度组PO.05，2.500mgj皿l浓度组PO.Ol);2坛紫菜各浓度组均能显著促进淋巴细胞转化(0.313昭/ml浓度组PO.05，其余三个浓度组PO.Ol)t并且存在明显的剂量依赖关系。2.海藻水溶性提取液在体外能激活小鼠单核细胞并产生大量TNF，吞噬或杀伤肿瘤细胞，与阴性对照组(PBS)比较步四种海藻提取液均可显著剌激小鼠单核细胞产生TNF-a(PO.01)。3.海带水溶性提取液除低浓度组(0.625mg/m1)对S180细胞和弘一OV3细胞的增殖没有明显抑制作用外9其余均显示不同程度的抑制作用，低浓度组抑制作用较弱?高浓度组抑制作用较强。裙带菜水浴性提取液各浓度组对四种肿瘤细胞的增殖反应均有很强的抑制作用(PO.Ol)，且随着浓度的增却步抑制作用有增强的趋势，2.500mg/ml、5.OOOmg/ml和10.OOOmg/ml浓度组对S180细胞增殖的抑制作用与顺铅比较无显著性差异(PO.05)，抑制率高达90%以上10.OOOmg/ml浓度级对TE才3细胞和SK-OV3细胞增殖的抑制作用与)1顶铅比较也没有明显差异(PO.O日。条斑紫菜水溶性提取液除低浓度组(0.625mg/ml和1.250mg/ml)对TE-13细胞的增殖反应没有明显抑制作用外，其余各浓度组对四种肿瘤细胞均显示有程度不同的体外细胞毒作用:坛紫菜提取液0.625mg/ml、1.250mg/川、2.500mg/m1浓度组对S180细胞的增殖没有明显抑制作用，其余均显示不同程度的抑制作用。4.裙带菜水溶性提取液通过SephadexG-IOO层析柱分离后F从分离曲线上看F裙带菜的成分主要为蛋白质及少量的多糖。3结论:海带、裙带菜、条斑紫菜和坛紫菜对小鼠淋巴细胞的增殖均有不同程度的促进作用:囚种海藻均可显著剌激小鼠单核细胞产生TNF-a;囚种海藻特别是新鲜裙带菜对K562、S180、TE-13