神经型尼古丁受体α3亚单位沉默对sh-sy5y细胞β淀粉样蛋白和凋亡的影响及其机制研究-study on the effect and mechanism of silencing of neuronal nicotine receptor α 3 subunit on β -amyloid protein and apoptosis in sh - sy5y cells.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2011 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 前 言 阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease，简称 AD，又称老年性痴呆)，是一种 主要在老年期发生的以智力缓慢性进行性丧失为主要特征的神经退变性疾病。 AD 已成为继心脏病、癌症、中风后的第四位死亡原因。其主要临床表现为进行 性认知功能障碍、记忆力衰退、性格和行为改变等。在欧美发达国家及我国， AD 发病有增多的趋势。一般年龄在 65 岁左右时，AD 的发病率约为 2-5%,年龄 75 岁左右时，发病率约为 10%，年龄到 90 岁时，AD 发病率可高达 35-40%[1-2]。 病理学上以细胞外老年斑 (Senile plaques, SPs)形成及神经细胞内神经原纤维缠 结(Neurofibrillary tangles, NFTs)及神经元丢失为主要特征[3-5]。 老年斑的主要成分为?-淀粉样蛋白(?-Amyloid peptide，A?)，是一种神经毒 性物质，可以引起神经元的损伤和调亡，在 AD 的发病中起着重要的作用。A? 是APP 经 ?-及 ?-分泌酶水解生成的 39-43个氨基酸多肽，其中的25-35氨基酸残 基是神经毒性必需结构。β-分泌酶（BACE）是启动Aβ形成的关键限速酶。因 此，BACE有望成为治疗AD 的作用靶点，为开发治疗AD提供了一条新思路[6]。 在AD的发病机制中胆碱能受体的改变引起了越来越多的重视，胆碱能受体 包括尼古丁受体和毒蕈碱样受体，尼古丁受体又分为神经型和肌肉型。nAChR 与大脑学习记忆、智力发育和识别能力等脑功能有关，还具有明显的神经保护作 用[7]，在阿尔茨海默病的发病中起着重要的作用。 本课题组前期研究表明α3 nAChR亚单位具有一定的神经保护作用，在AD的 发病机制中具有重要作用[8]，但其具体机制我们并不清楚，其是否与β淀粉样蛋 白生成，及与其密切相关的β分泌酶有关，有待本实验进一步研究。本研究将细 胞分为正常对照组(细胞未经任何处理，无质粒转染) ，转染空质粒Negative control pSilencer 3.1-H1 neo的空质粒对照组，转染 α3 nAChR pSilencer 3.1-H1 neo 质粒的实验组，观察α3 nAChR亚单位对Aβ含量的影响及对β分泌酶两个亚 型（Bace 1, Bace 2）mRNA及蛋白表达有影响。 细胞有两种死亡途径，即凋亡和坏死。凋亡是一种能量依赖性的细胞自我销 毁的主动过程。凋亡对神经系统的发育是必需的，但凋亡过度会导致包括 AD 在 内的中枢神经系统的退行性疾病[9]。神经退行性疾病与凋亡关系密切，AD 三大 病理表现之一的神经元大量丢失与细胞凋亡有关[10]。细胞凋亡在 AD 患者神经元 的丢失中扮演重要角色,与 AD 的发生、发展关系密切[11]。近年研究表明，A?与 促进神经元凋亡有关，A?沉积所致的神经细胞凋亡是 AD 的发病机制之一。 nAChR 与凋亡关系密切， HYPERLINK /pubmed?term=%22Utsumi%20T%22%5BAuthor%5Damp;itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_RVAbstract Utsumi T[12]实验表明 nACh 在衣霉素诱导 PC12 细 胞凋亡中发挥保护作用，其机制与凋亡调节有关。本研究将探讨在 AD 中， α3nAChR 亚单位是否参与 Aβ引起的神经细胞凋亡。 在细胞中存在一些特殊的蛋白质信息传递链，它们将细胞外部的种种调节 信号传递到核内基因，引起细胞生理活动的相应变化。这些蛋白质信息传递链被 称为细胞信号转导通路。丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase MAPK）信号通路是其中一条主要的基本信息传递链，它与细胞的生长、发育、 分化、凋亡等均有密切联系 [13]。MAPK 可参与介导细胞生长、发育、分裂、死 亡以及细胞间功能同步等多种细胞生理过程[14]。MAPK 信号转导通路与神经元 的存活和凋亡密切相关，MAPK 信号通路参与细胞凋亡[15]。哺乳类细胞主要存 在着并行的三条 MAPKs 信号通路（ERK 通路、JNK 通路、P38 MAPK 通路）。 P38 蛋白激酶是由 Han 等用高渗和内毒素刺激哺乳动物细胞，从中分离纯化 出一个 38kD 的酪氨酸磷酸化蛋白激酶，称之为 P38 蛋白激酶。用神经生长因子 (NGF)刺激大鼠嗜铬细胞瘤 PC-12 细胞，9～14 天后，PC-12 细胞表现出良好的 分化特性，此时将 NGF 从培养基中撤离，PC-12 细胞迅速出现凋亡，与此同时