肾透明细胞癌von hippel-lindau vhl蛋白调控hif-1αmrna表达的分子机制-molecular mechanism of von hippel - lindau vhl protein regulating hif - 1α mrna expression in renal clear cell carcinoma.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 背景： 已有的研究认为VHL基因在原发性散发性肾透明细胞癌 (RCC)发病中起重 要作用 ,但肿瘤形成机理仍有较多争论。VHL存在于细胞浆，与其他一些蛋白 形成E3连接酶复合物，泛素化降解其他蛋白。缺氧诱导因子（HIF)是近年来研 究较为热门的与肿瘤形成有关的因子。在常氧状态下,HIFα的脯氨酸羟基化,与 VHL蛋白结合,于是触发泛素-蛋白酶体[ubiquitin-proteasome]蛋白水解途径，使其 迅速降解[15]。前期研究发现，在肾癌细胞株及临床肾透明细胞癌中，VHL蛋白促 进HIF-1αmRNA的表达。进一步的研究发现，VHL蛋白对HIF-1α基因转录具有促 进作用，但其分子机制不明，VHL蛋白对HIF-1αmRNA表达的影响未见文献报导。 前期研究结果提示，VHL蛋白不仅可以从蛋白水平调控HIF1α的表达，而且可以 从分子水平上调控HIF-1αmRNA的表达。 目的： 基于上述理论背景，本研究目的在于初步求证肾细胞癌中 VHL 蛋白和 HIF-1 α基因中的转录调控区域有关联，并能促进 HIF-1αmRNA 表达，进一步明确其 分子机制及意义。 方法： Western blot 检测 VHL 蛋白表达量显示 RCC4 VHL(-)细胞株 VHL 蛋白表达 量为零，差异具有统计学意义(P＜0.05).说明此细胞株 VHL 基因敲除成功。通过 实时荧光定量 PCR 检测, VHL 阴性肾癌细胞株与 VHL 阳性肾癌细胞株存在 HIF-1αmRNA 的表达差异，VHL 阳性肾癌细胞株(RCC4T3-14) HIF-1αmRNA 的表达明显高于阴性肾癌细胞株(RCC4)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。该实 验至少重复 3 次。 结果： 通过 Western blot 检测 VHL 蛋白表达量及差异确定 RCC4 VHL(-)细胞株 VHL 蛋白表达量为零，差异具有统计学意义(P＜0.05).说明此细胞株 VHL 基因 敲除成功。通过实时荧光定量 PCR 检测，RCC4 VHL(-)VHL 阴性肾癌细胞株 (RCC4) 与 VHL 阳性肾癌细胞株(RCC4T3-14)存在 HIF-1αmRNA 的表达差异， VHL 阳性肾癌细胞株(RCC4T3-14) HIF-1αmRNA 的表达明显高于阴性肾癌细 II 胞株(RCC4)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。该实验至少重复 3 次。 结论： VHL 蛋白不仅可以从蛋白水平下调 HIF-1α 蛋白，而且可以从分子水平促进 HIF-1αmRNA 表达，VHL 蛋白的结构提示，pVHL 不是一个直接与 DNA 结合的 转录因子，其可能通过一个中间物质作用于 HIF-1α 基因，调节其转录和表达， 这个中间物质还不明确，需进一步研究。 关键词：肾细胞癌 VHL 基因 HIF-1α III Ab Abstract ABSTRACT Background: Existing research think VHL tumor-suppressor genes play an important role in primary sporadic renal clear cell carcinoma (RCC),the mechanism of tumor formation are still have more arguments.VHL genes exists in cytoplasm, by forming E3 ligase complexes with some other proteins, which make the protein ubiquitin degradation ,Hypoxia inducing factor (HIF) is factors related to the tumor formation researched more popularly in recent years.Under constant oxygen condition, HIF α proline ,when hydroxylated, combining with VHL protein, and trigger the ubiquitin - proteasome ubiquitin - proteasome proteolytic pathway, making itself rapid degradation [15].Previous studies have found that in renal cancer cell lines and clinical renal clear cell ca