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菌 种 基本概念： 标准菌株：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。 标准储备菌株：由标准菌株经一次传代得到的培养物。 商业派生菌株：由供应商提供的所有特性与标准菌株等效的菌株。 代：将活的微生物接种到新鲜培养基中进行培养，并希望获取新的微生物培养物。这种操作方式，新培养物对接种培养物而言就称为一代。 工作菌株：由标准储备菌株经传代得到的培养物。 菌种 — 菌种保藏的概念 菌种保藏机构 目前﹐世界上约有 550个菌种保藏机构。 国外的菌种保藏机构： 世界菌种保藏联合会(WFCC) 美国菌种保藏中心(ATCC) 美国农业部“北部地区研究实验室” (NRRL) 英国“国立标准菌种收藏所” (NCTC) 英国“国际真菌研究所” (CMI) 荷兰“真菌中心保藏所” (CBS) 日本微生物菌种保藏联合会(JFCC) 菌种 — 菌种保藏的概念 我国的菌种保藏机构 普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC) 农业微生物菌种保藏管理中心(ACC) 工业微生物菌种保藏管理中心(CICC) 医学微生物菌种保藏管理中心(CMCC) 抗菌素菌种保藏管理中心(CACC) 兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC) 林业微生物菌种保藏管理中心(CFCC) 专利微生物菌种保藏管理中心 菌种 — 菌种保藏的概念 《中国药典》2015年版 实验室认可准则 其他行业标准 菌种 — 菌种保藏和使用的法规 中国药典2015年版 药品微生物实验室规范指导原则中对菌种有了较为明确的规定 允许使用标准菌株和商业派生菌株 标准菌株应按保藏机构提供的说明进行复活 标准储备菌株应进行纯度和特性确认 标准储备菌株建议采用低温冷冻干燥、液氮贮存或超低温冷冻保藏的方法 标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株 冷冻菌株解冻后不得重新冷冻和再次使用 工作菌株不可替代标准菌株，商业派生菌株仅可用作工作菌株 菌种 — 菌种保藏和使用的法规 菌种保存的原理是根据菌种的生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本上处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。因此低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。 菌种 — 菌种保存的原理 选择适宜的培养基﹑培养温度和菌龄﹐以便得到健壮的细胞或孢子﹔保存于低温﹑隔氧﹑干燥﹑避光的环境中﹐尽量降低或停止微生物的代谢活动﹐减慢或停止生长繁殖﹔不被杂菌污染﹐在较长时期内保持著生活能力。 菌种 — 菌种保藏的要点 菌种保存方法有多种，如琼脂斜面低温保存法、液体石蜡保存法、干燥（沙土）保存法、冷冻真空保存法、浓氮超低温保存法等。但对不同的微生物应通过保存试验来选择最适宜的保存方法。 注意事项：保存的菌种均应是新鲜纯菌培养物，至少应是第三代的培养物。不同细菌用不同培养基，定期检查菌种保存环境做好记录。 菌种 — 菌种保藏的方法 琼脂斜面低温保存法： 此方法是实验室菌种最常用的保存方法，具有操作简便，使用方便的优点。具体方法是：用无菌的接种环挑取菌株一环，划线于适宜的琼脂斜面（细菌为营养琼脂斜面、真菌为改良马丁琼脂斜面）上，细菌置37℃培养18~24小时，真菌置25℃培养18~24小时。 菌种 — 菌种保藏的方法 矿油封藏法： 将化学纯的液体石蜡(矿油)经高压蒸气灭菌﹐放在40℃恒温箱中蒸发其中的水分﹐然後注入斜面培养物中﹐使液面高出斜面约 1厘米。将试管直立﹐放在15-20℃室温中保存。由于在斜面培养物上覆盖一层液体﹐既能隔绝空气﹐又能防止培养基因水分蒸发而干燥﹐可以延长菌种保藏的时间。但注入的液体必须不与培养基混溶﹑对菌种无毒﹐不易被利用和挥发。此法适用于酵母菌﹑芽孢杆菌﹔不适用于固氮菌﹑乳酸杆菌﹑明串珠菌﹑法门氏菌和毛黴目中的大多数属种。此法简便易行﹐但必须注意防火和污染 菌种 — 菌种保藏的方法 甘油冷冻管保存法： 用无菌接种环挑取菌种接种在相应的琼脂培养基斜面上，置适宜的培养条件培养后，加入含0.05%聚山梨脂80的胰酪大豆胨液体培养基3~5ml，并通过接种环轻轻刮取菌苔，使细菌充分扩散，制成菌悬液，再加入等体积的、浓度为20%的无菌甘油溶液，轻轻振摇，最后分装于无菌小试管中，置-30℃条件下保存，-80℃保存效果更佳 菌种 — 菌种保藏的方法 此法应注意菌悬液的浓度应高一些，另外甘油的浓度不宜过高，否则影响细菌细胞渗透压，引起细菌死亡。厌氧菌不宜用此法保存。 菌种 — 菌种保藏的方法 沙土管法： 将沙或土过筛﹑烘干﹑装管﹑灭菌﹑然後将菌种制成孢子悬液滴入其中混匀﹐放到盛氯化钙的干燥器里吸除水分﹐干燥後保存或用火焰封管後保存。吸附在干燥沙土上的孢子因缺水而处于休眠状态﹐可保存较长时期。