体内period2基因调控x线照射后人胶质瘤细胞mdm2基因致凋亡的分子机制研究-molecular mechanism of mdm 2 gene apoptosis in human glioma cells induced by x - ray irradiation regulated by period 2 gene in vivo.docxVIP

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2018-08-07 发布于上海
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体内period2基因调控x线照射后人胶质瘤细胞mdm2基因致凋亡的分子机制研究-molecular mechanism of mdm 2 gene apoptosis in human glioma cells induced by x - ray irradiation regulated by period 2 gene in vivo.docx

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体内period2基因调控x线照射后人胶质瘤细胞mdm2基因致凋亡的分子机制研究-molecular mechanism of mdm 2 gene apoptosis in human glioma cells induced by x - ray irradiation regulated by period 2 gene in vivo

宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名主成象签名jL纠先2015年Lt月2.0日工015年斗月2.0日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密论文在解密后应遵守此规定)./L电_l论文作者签名主成忽论文导师签名AJ飞1:f1015年斗月10日2015年斗月20日万方数据体内Period2基因调控X线照射后人胶质瘤细胞MDM2基因致凋亡的分子机制研究摘要目的体内探究生物钟基因Period2的低表达在X线照射引起的胶质瘤凋亡过程中起到的作用及其分子调控机制。方法Period2-shRNA慢病毒、Control-shRNA非特异性干扰慢病毒各自感染人p53野生型人胶质瘤U343细胞后，shRNA-Period2细胞组（Period2低表达）及对照病毒细胞组由puromycin筛选出；shRNA-Period2细胞组、Control对照病毒细胞组及Control空白处理细胞组分别注射裸鼠颈后皮下，等到各组裸鼠成瘤的瘤块体积达到标准（1000mm3），给予10GyX线照射3组胶质瘤并以此时为0时，分别于24h、48h、72h后，处死裸鼠并收集瘤体组织。TUNEL技术检测实验组凋亡情况、磷酸化H2AX含量检测实验组的DNA的损伤情况，使用qRT-PCR及WesternBlot检测，X线照射后，实验各组中与DNA损伤-修复重要因子ATM、凋亡相关的p53、MDM2以及c-myc等的含量。结果细胞实验可见Period2-shRNA慢病毒有效降低在人胶质瘤U343细胞中生物钟基因Period2的表达含量；X线处理后，在X线处理后的24h、48h、72h各个时间点，跟Control实验组比较，Period2低表达的实验组DNA损伤更轻，凋亡率更低，且随着时间的增加，Period2低表达组的DNA损伤和细胞凋亡都开始递增；随Period2表达量的下调，ATM表达水平减少，p53表达水平减少，而c-myc的表达水平增加，MDM2的表达水平增加。结论我们实验中人U343胶质瘤对X线的敏感性的降低是通过下调生物钟基因Period2的表达达到的；并通过调控ATM、p53、c-myc、MDM2等的表达减弱了ATM-p53-MDM2通路对凋亡的促进作用，抑制了胶质瘤的凋亡。I关键词Period2，U343，X线照射，凋亡，MDM2IIMolecularMechanismsofWhichPeriod2RegulatesMDM2ofHumanGliomaCelltoStimulateApoptosisAfterX-rayirradiationinVivoABSTRACTObjectiveToinvestigatethemechanismofwhichPeriod2kockdowninfluencesapoptosisingliomawhenitwasexposedtoX-rays.MethodsthePeriod2-shRNA，Control-shRNAlentivirusofnonspecific-interferenceinfectedhumanU343gliomacellsofp53wild-typeinordertocollatePeriod2knockdowncellsandControlviruscellsselectedbypuromycin.CellsofshRNA-Period2、shRNA-Control、blankcontrolgroupwereinjectedsubcutaneouslyinnecksofnudemices.Untilthetumors’volumereachedthestandard(1000mm3),weapplied10GyX-rayirradiationtothethreegroupsofgliomas,andtreatthistimeas0h.Micesweresarcificedandtumorswereharvestedat24h,48h,72hafterirradiationrespectively.Theapoptos